| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 猪德尔塔冠状病毒 | 第12-14页 |
| 1.1.1 PDCoV分类地位 | 第12页 |
| 1.1.2 PDCoV病毒粒子 | 第12-13页 |
| 1.1.3 PDCoV基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 PDCoV临床症状及病理变化 | 第14页 |
| 1.1.5 PDCoV流行病学 | 第14页 |
| 1.2 冠状病毒S蛋白的结构和功能 | 第14-15页 |
| 1.3 冠状病毒感染细胞过程 | 第15-16页 |
| 1.4 冠状病毒受体的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 鉴定病毒细胞受体的方法 | 第17-18页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 对已知猪冠状病毒受体的鉴定 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 毒株与细胞 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器,试剂与耗材 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 pAPN真核表达载体的构建 | 第19-22页 |
| 2.2.2 pAPN基因上调表达对PDCoV复制的影响 | 第22-23页 |
| 2.2.3 PDCoV感染BHK-21细胞 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PDCoV感染BHK-pAPN细胞 | 第24页 |
| 2.2.5 siRNA干扰pAPN对病毒复制的影响 | 第24页 |
| 2.2.6 可溶性pAPN阻断试验 | 第24-25页 |
| 2.2.7 对已知猪冠状病毒受体Sialicacid的鉴定 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-30页 |
| 2.3.1 pAPN全长基因的扩增及重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 pAPN基因上调表达对PDCoV复制无影响 | 第26页 |
| 2.3.3 BHK-21细胞是PDCoV非易感细胞 | 第26-27页 |
| 2.3.4 PDCoV不感染BHK-pAPN细胞 | 第27-28页 |
| 2.3.5 siRNA干扰pAPN对PDCoV复制无影响 | 第28-29页 |
| 2.3.6 可溶性pAPN不能阻断PDCoV感染 | 第29-30页 |
| 2.3.7 Sialicacid不能阻断PDCoV感染 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 PDCoV受体分子的初步筛选 | 第32-42页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 毒株与细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器、试剂与耗材 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 pcDNA3.1-S1-Fc真核表达质粒的构建 | 第32-34页 |
| 3.2.2 PDCoV-S1-Fc重组蛋白的表达 | 第34页 |
| 3.2.3 PDCoV-S1-Fc重组蛋白的纯化与鉴定 | 第34页 |
| 3.2.4 免疫沉淀筛选与PDCoV-S1互作的靶蛋白 | 第34-35页 |
| 3.2.5 病毒铺覆蛋白法筛选PDCoV的受体 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 pcDNA3.1-S1-Fc重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 Westernblot鉴定重组蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE鉴定重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 免疫沉淀筛选与PDCoV-S1互作的靶蛋白 | 第39页 |
| 3.3.5 病毒铺覆蛋白法筛选PDCoV受体蛋白 | 第39-40页 |
| 3.3.6 质谱鉴定结果 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 对筛选蛋白的验证 | 第42-50页 |
| 4.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.1 毒株与细胞 | 第42页 |
| 4.1.2 主要仪器,试剂与耗材 | 第42页 |
| 4.2 方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.2 筛选蛋白的表达与鉴定 | 第43页 |
| 4.2.3 过表达BHK-21细胞及ST细胞对病毒增殖的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.4 pHSPCB上调表达对病毒增殖的影响 | 第44页 |
| 4.2.5 siRNA干扰pHSPCB对病毒复制的影响 | 第44-45页 |
| 4.3 结果 | 第45-48页 |
| 4.3.1 筛选基因真核表达载体的构建 | 第45页 |
| 4.3.2 筛选基因的表达与鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.3 过表达BHK-21及ST细胞对病毒增殖的影响 | 第46页 |
| 4.3.4 上调pHSPCB蛋白的鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.5 pHSPCB上调表达促进病毒的增殖 | 第47页 |
| 4.3.6 siRNA干扰pHSPCB | 第47-48页 |
| 4.3.7 pHSPCBsiRNA抑制病毒复制 | 第48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
