| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 植物漆酶研究进展 | 第10-17页 |
| 1.2.1 漆酶及基因家族的发现 | 第10-11页 |
| 1.2.2 漆酶的基本特征 | 第11-12页 |
| 1.2.3 植物漆酶基因的克隆、表达与亚细胞定位 | 第12页 |
| 1.2.4 植物漆酶的调控 | 第12-13页 |
| 1.2.4.1 顺式作用元件调控 | 第12-13页 |
| 1.2.4.2 MicroRNA调控 | 第13页 |
| 1.2.5 植物漆酶基因的功能 | 第13-17页 |
| 1.2.5.1 木质素合成 | 第13-15页 |
| 1.2.5.2 逆境响应 | 第15-16页 |
| 1.2.5.3 其他生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.3 主要研究内容 | 第17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 柑橘漆酶家族基因生物信息学分析及启动子克隆 | 第18-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-22页 |
| 2.1.1 生物信息学分析 | 第18页 |
| 2.1.2 柑橘漆酶基因启动子克隆 | 第18-22页 |
| 2.1.2.1 伏令夏橙叶片DNA提取 | 第19页 |
| 2.1.2.2 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.1.2.3 PCR反应体系及扩增程序 | 第20页 |
| 2.1.2.4 PCR产物回收纯化 | 第20-21页 |
| 2.1.2.5 目的基因的连接反应 | 第21页 |
| 2.1.2.6 转入大肠杆菌 | 第21-22页 |
| 2.1.2.7 质粒的提取、验证及测序 | 第22页 |
| 2.2 结果与分析 | 第22-38页 |
| 2.2.1 柑橘漆酶家族全基因组鉴定及染色体分布 | 第22-23页 |
| 2.2.2 柑橘漆酶蛋白序列和糖基化位点分析 | 第23-24页 |
| 2.2.3 柑橘漆酶基因结构及保守区分析 | 第24-28页 |
| 2.2.4 柑橘漆酶基因系统发育分析 | 第28-30页 |
| 2.2.5 柑橘漆酶基因miRNA靶位点分析 | 第30页 |
| 2.2.6 RNA-seq分析漆酶基因在柑橘不同组织中的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.7 柑橘漆酶启动子顺式调控元件分析 | 第31-34页 |
| 2.2.8 伏令夏橙叶片基因组DNA提取及质量检测 | 第34页 |
| 2.2.9 伏令夏橙漆酶基因启动子PCR扩增 | 第34页 |
| 2.2.10 CsLAC启动子序列分析 | 第34-38页 |
| 2.2.11 CsLAC1,CsLAC3启动子顺式调控元件分析 | 第38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 柑橘漆酶基因特异性表达分析 | 第41-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 3.1.1.2 主要生化试剂 | 第41页 |
| 3.1.1.3 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 3.1.2.1 伏令夏橙组培苗及胚性愈伤组织的培育 | 第42页 |
| 3.1.2.2 多种逆境胁迫及激素处理 | 第42-43页 |
| 3.1.2.3 总RNA提取 | 第43页 |
| 3.1.2.4 反转录合成cDNA | 第43-44页 |
| 3.1.2.5 引物设计 | 第44-45页 |
| 3.1.2.6 Realtime PCR反应 | 第45-46页 |
| 3.1.2.7 Real time PCR数据分析 | 第46页 |
| 3.2 结果与分析 | 第46-53页 |
| 3.2.1 CsLAC基因组织特异性表达分析 | 第47页 |
| 3.2.2 CsLAC基因响应光诱导的表达分析 | 第47-48页 |
| 3.2.3 CsLAC基因响应PEG诱导的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.2.4 CsLAC基因响应高温诱导的表达分析 | 第49页 |
| 3.2.5 CsLAC基因响应低温诱导的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.2.6 CsLAC基因响应水杨酸诱导的表达分析 | 第50-51页 |
| 3.2.7 CsLAC基因响应茉莉酸甲酯诱导的表达分析 | 第51-52页 |
| 3.2.8 CsLAC基因响应脱落酸诱导的表达分析 | 第52-53页 |
| 3.3 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 低温胁迫下柑橘漆酶活性变化分析 | 第55-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-57页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.2 漆酶活性的测定及数据分析 | 第55-57页 |
| 4.1.2.1 漆酶活性测定 | 第55-56页 |
| 4.1.2.2 可溶性蛋白含量测定 | 第56页 |
| 4.1.2.3 相对电导率(REC)测定 | 第56-57页 |
| 4.2 结果与分析 | 第57-59页 |
| 4.2.1 伏令夏橙和枳壳低温处理后可溶性蛋白含量的变化 | 第57页 |
| 4.2.2 伏令夏橙和枳壳低温处理后漆酶活性的变化 | 第57-58页 |
| 4.2.3 伏令夏橙和枳壳低温处理后相对电导率(REC)的变化 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录1 柑橘漆酶多重序列比对分析 | 第68-77页 |
| 附录2 CSLAC1启动子顺式元件分析 | 第77-80页 |
| 附录3 CSLAC3启动子顺式元件分析 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
