| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 综述 | 第13-28页 |
| 1.1 植物分泌蛋白及其相关研究 | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物根系分泌蛋白 | 第13-15页 |
| 1.1.2 植物胞间液蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.3 植物分泌蛋白的分泌途径 | 第16-17页 |
| 1.2 生物信息学 | 第17-20页 |
| 1.2.1 生物信息学相关技术 | 第17-19页 |
| 1.2.2 生物信息学的应用前景 | 第19-20页 |
| 1.3 基因克隆技术 | 第20-21页 |
| 1.4 解析植物未知功能基因的策略 | 第21-23页 |
| 1.5 植物遗传转化研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5.1 原位转化法 | 第23-24页 |
| 1.5.2 离体转化法 | 第24-25页 |
| 1.6 油菜基因BnaC03g45680D | 第25-26页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 油菜基因BnaC03g45680D编码蛋白的生物信息学分析 | 第28-43页 |
| 2.1 基因BnaC03g45680D编码蛋白的来源与生物信息分析工具 | 第28-29页 |
| 2.1.1 基因BnaC03g45680D编码蛋白的来源 | 第28页 |
| 2.1.2 生物信息学分析软件 | 第28-29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-41页 |
| 2.2.1 EnsemblPlants数据库分析BnaC03g45680D基因相关功能 | 第29-30页 |
| 2.2.2 NCBI数据库查找基因BnaC03g45680D编码蛋白氨基酸序列 | 第30-31页 |
| 2.2.3 基因BnaC03g45680D编码蛋白BLAST比对获得同源序列 | 第31-32页 |
| 2.2.4 系统进化树的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.5 基因BnaC03g45680D编码蛋白的理化性质分析 | 第33页 |
| 2.2.6 基因BnaC03g45680D编码蛋白的亲水性和疏水性分析 | 第33-34页 |
| 2.2.7 基因BnaC03g45680D编码蛋白的亚细胞定位和信号肽预测 | 第34-35页 |
| 2.2.8 基因BnaC03g45680D编码蛋白的跨膜结构域预测 | 第35-36页 |
| 2.2.9 基因BnaC03g45680D编码蛋白的N-糖基化位点预测 | 第36-37页 |
| 2.2.10 基因BnaC03g45680D编码蛋白的磷酸化位点预测 | 第37-39页 |
| 2.2.11 基因BnaC03g45680D编码蛋白保守结构域预测 | 第39页 |
| 2.2.12 基因BnaC03g45680D编码蛋白的二级结构预测分析 | 第39-40页 |
| 2.2.13 基因BnaC03g45680D编码蛋白的三级结构预测 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-43页 |
| 3 甘蓝型油菜BnaC03g45680D基因克隆载体的构建 | 第43-57页 |
| 3.1 试验材料及相关仪器、试剂 | 第43-46页 |
| 3.1.1 培养材料 | 第43页 |
| 3.1.2 菌株和质粒： | 第43页 |
| 3.1.3 主要试验仪器 | 第43-44页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第44-46页 |
| 3.2 试验方法 | 第46-53页 |
| 3.2.1 甘蓝型油菜叶片RNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.2.2 提取RNA纯度的测定 | 第47页 |
| 3.2.3 提取RNA琼脂糖凝胶验证 | 第47页 |
| 3.2.4 反转录 | 第47-48页 |
| 3.2.5 RT-PCR扩增目的片段 | 第48-49页 |
| 3.2.5.1 目的基因引物设计与合成 | 第48-49页 |
| 3.2.5.2 高保真酶PCR反应体系 | 第49页 |
| 3.2.6 琼脂糖凝胶DNA回收 | 第49-50页 |
| 3.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞制备 | 第50-51页 |
| 3.2.8 PCR产物连接到pBM26载体 | 第51页 |
| 3.2.9 连接产物的转化过程 | 第51页 |
| 3.2.10 阳性菌落的鉴定 | 第51-53页 |
| 3.2.10.1 菌落PCR检测 | 第51-52页 |
| 3.2.10.2 重组质粒的提取 | 第52-53页 |
| 3.2.11 重组质粒测序和菌种保存 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-55页 |
| 3.3.1 甘蓝型油菜鼎油杂4号叶片RNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.3.2 RT-PCR的结果 | 第54页 |
| 3.3.3 菌落PCR验证 | 第54-55页 |
| 3.3.4 重组载体pBM26-BnaC03g45680D测序 | 第55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 4 PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D植物表达载体的构建 | 第57-70页 |
| 4.1 主要试验仪器和药品 | 第57-58页 |
| 4.1.1 主要试验仪器 | 第57页 |
| 4.1.2 主要试验试剂 | 第57-58页 |
| 4.2 试验方法 | 第58-64页 |
| 4.2.1 从重组载体上扩增目的基因 | 第58-59页 |
| 4.2.2 目的片段DNA纯化回收及酶切 | 第59-60页 |
| 4.2.2.1 目的片段DNA纯化回收 | 第59-60页 |
| 4.2.2.2 目的片段DNA酶切 | 第60页 |
| 4.2.3 表达载体PCAMBIA1300S质粒提取 | 第60-61页 |
| 4.2.3.1 表达载体PCAMBIA1300S质粒提取 | 第60-61页 |
| 4.2.3.2 表达载体PCAMBIA1300S酶切及胶回收 | 第61页 |
| 4.2.4 目的片段和线性化表达载体PCAMBIA1300S连接与转化 | 第61-62页 |
| 4.2.5 鉴定阳性克隆 | 第62-63页 |
| 4.2.5.1 PCR检测 | 第62-63页 |
| 4.2.5.2 酶切验证 | 第63页 |
| 4.2.6 PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D根癌农杆菌感受态细胞的转化 | 第63页 |
| 4.2.7 PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D农杆菌转化菌落PCR验证 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-67页 |
| 4.3.1 目的片段扩增电泳图 | 第64页 |
| 4.3.2 目的片段酶切电泳图 | 第64-65页 |
| 4.3.3 PCAMBIA1300S载体酶切电泳图 | 第65页 |
| 4.3.4 表达载体PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D菌落PCR验证 | 第65-66页 |
| 4.3.5 表达质粒PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D的酶切鉴定 | 第66页 |
| 4.3.6 表达载体PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D测序 | 第66-67页 |
| 4.3.7 表达载体PCAMBIA1300S-BnaC03g45680D农杆菌转化菌落PCR验证 | 第67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-70页 |
| 5 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录A | 第79-83页 |
| 个人简历及在读期间科研成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
