摘要 | 第10-13页 |
Abstract | 第13-17页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第18-19页 |
第一章 促性腺激素抑制激素及基因免疫研究进展 | 第19-46页 |
1 促性腺抑制激素研究进展 | 第19-40页 |
1.1 GnIH的结构及命名 | 第20-22页 |
1.2 GnIH神经元的分布 | 第22-25页 |
1.3 GnIH受体的特性及分布 | 第25-27页 |
1.3.1 GnIH受体的特性 | 第25-26页 |
1.3.2 GnIH受体的分布 | 第26-27页 |
1.4 GnIH的生理功能 | 第27-33页 |
1.4.1 GnIH对下丘脑的生理作用 | 第27-30页 |
1.4.2 GnIH对垂体的生理作用 | 第30-31页 |
1.4.3 GnIH对性腺的生理作用 | 第31-33页 |
1.5 GnIH的作用机制 | 第33-35页 |
1.6 GnIH对生殖激素以外激素的影响 | 第35-36页 |
1.7 GnIH对季节性繁殖及采食量的调控 | 第36-37页 |
1.7.1 GnIH对季节性繁殖的影响 | 第36页 |
1.7.2 GnIH对采食量的调控 | 第36-37页 |
1.8 GnIH的表达调控 | 第37-40页 |
1.8.1 褪黑素对GnIH的调控 | 第37-38页 |
1.8.2 应激对GnIH的调控 | 第38-40页 |
2 提高动物繁殖力的基因免疫研究进展 | 第40-44页 |
2.1 抑制素基因免疫 | 第41-42页 |
2.2 提高抑制素基因免疫效果的方法 | 第42-44页 |
3 研究的目的与意义 | 第44-46页 |
第二章 GnIH对雄鼠生殖与生殖内分泌的分子调控机制研究 | 第46-69页 |
引言 | 第46-48页 |
1 材料和方法 | 第48-57页 |
1.1 材料 | 第48-50页 |
1.1.1 实验动物 | 第48页 |
1.1.2 药品 | 第48-49页 |
1.1.3 主要试剂 | 第49页 |
1.1.4 主要试剂盒 | 第49-50页 |
1.2 方法 | 第50-57页 |
1.2.1 实验动物处理 | 第50页 |
1.2.2 组织Trizol法提取RNA | 第50-51页 |
1.2.3 第一链cDNA的合成 | 第51页 |
1.2.4 基因相对表达量分析 | 第51-52页 |
1.2.5 睾丸组织的石蜡包埋、切片 | 第52-53页 |
1.2.6 睾丸组织的HE染色 | 第53页 |
1.2.7 睾丸组织的TUNEL检测 | 第53-54页 |
1.2.8 Western blot检测目的蛋白的表达 | 第54-57页 |
1.2.9 INHB、T、LH激素的ELISA测定 | 第57页 |
1.3 数据分析 | 第57页 |
2 结果 | 第57-65页 |
2.1 不同浓度的GnIH处理对血浆INHB、T及LH浓度的影响 | 第57-58页 |
2.2 GnIH对下丘脑GnRH-I mRNA、Kiss-1mRNA及NPY mRNA表达的影响 | 第58-59页 |
2.3 GnIH对小鼠腺垂体FSH β mRNA、LH β mRNA及GnRHR mRNA表达的影响 | 第59-60页 |
2.4 GnIH对类固醇生成相关酶基因表达的影响 | 第60-61页 |
2.5 GnIH处理对调控精子生成主要因子表达的影响 | 第61-62页 |
2.6 GnIH能够引起小鼠睾丸曲细精管异常组织学变化,诱导生殖细胞凋亡 | 第62-65页 |
3 讨论 | 第65-69页 |
第三章 GnIH对雌性小鼠颗粒细胞类固醇生成的影响及其调控机制研究 | 第69-85页 |
引言 | 第69-70页 |
1 材料和方法 | 第70-75页 |
1.1 材料 | 第70-71页 |
1.1.1 药品及实验动物 | 第70页 |
1.1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
1.1.3 主要的试剂盒 | 第71页 |
1.1.4 Western blot所用抗体 | 第71页 |
1.1.5 主要仪器设备 | 第71页 |
1.2 方法 | 第71-75页 |
1.2.1 小鼠卵巢颗粒细胞分离培养 | 第71-72页 |
1.2.2 小鼠粒细胞上GPR147蛋白的检测 | 第72页 |
1.2.3 GnIH处理颗粒细胞 | 第72页 |
1.2.4 小鼠颗粒细胞总RNA的提取 | 第72-73页 |
1.2.5 第一链的合成、实时定量分析基因相对表达量及Western blot检测细胞目的蛋白的表达 | 第73页 |
1.2.6 PCR检测颗粒细胞上GPR147受体的表达 | 第73-74页 |
1.2.7 流式检测细胞凋亡 | 第74-75页 |
1.2.8 激素测定 | 第75页 |
1.3 统计分析 | 第75页 |
2 结果 | 第75-81页 |
2.1 小鼠卵巢颗粒细胞上GPR147的表达检测 | 第75-78页 |
2.2 不同剂量小鼠GnIH处理对类固醇合成酶相关基因及FSHR基因表达的影响 | 第78-79页 |
2.3 Gn IH 处理对 E2,P 分泌量的影响 | 第79页 |
2.4 GnIH处理对颗粒细胞凋亡的影响 | 第79-81页 |
2.5 不同剂量的GnIH处理对颗粒细胞中p-ERK1/2 蛋白表达的影响 | 第81页 |
3 讨论 | 第81-85页 |
第四章 RFRP-3 和INH α(1-32)共表达基因疫苗的构建、鉴定及其对小鼠繁殖力的影响 | 第85-101页 |
引言 | 第86-87页 |
1 材料与方法 | 第87-94页 |
1.1 材料 | 第87-88页 |
1.1.1 质粒、菌种与细胞 | 第87页 |
1.1.2 酶和试剂 | 第87-88页 |
1.1.3 实验动物 | 第88页 |
1.1.4 主要仪器设备 | 第88页 |
1.2 方法 | 第88-94页 |
1.2.1 重组质粒的构建 | 第88-90页 |
1.2.3 目的基因片段的胶回收 | 第90-91页 |
1.2.4 小提质粒DNA | 第91-92页 |
1.2.5 重组质粒表达的鉴定 | 第92-93页 |
1.2.6 质粒大提 | 第93页 |
1.2.7 免疫小鼠 | 第93页 |
1.2.8 疫苗免疫对小鼠产仔数的评估 | 第93页 |
1.2.9 ELISA检测抗体 | 第93-94页 |
1.3 统计分析 | 第94页 |
2 结果 | 第94-98页 |
2.1 质粒的酶切鉴定 | 第94-95页 |
2.2 RT-PCR鉴定目的基因的表达 | 第95-96页 |
2.3 质粒转染HeLa细胞后的蛋白表达 | 第96页 |
2.4 疫苗免疫后对小鼠血浆抗INH抗体阳性值(P/N值)的影响 | 第96-97页 |
2.5 免疫后对小鼠抗RFRP-3 抗体阳性值(P/N值)的影响 | 第97-98页 |
2.6 免疫对小鼠产仔数的影响 | 第98页 |
3 讨论 | 第98-101页 |
第五章 RFRP-3 和INHα(1-32)共表达基因疫苗对绵羊生殖激素及繁殖力的影响 | 第101-111页 |
引言 | 第101-102页 |
1 材料和方法 | 第102-105页 |
1.1 材料 | 第102-103页 |
1.1.1 质粒疫苗 | 第102页 |
1.1.2 实验动物 | 第102页 |
1.1.3 ELISA相关溶液的配制 | 第102-103页 |
1.2 方法 | 第103-105页 |
1.2.1 疫苗完整性的鉴定 | 第103页 |
1.2.2 疫苗的大量制备 | 第103-104页 |
1.2.3 免疫母羊 | 第104页 |
1.2.4 母羊的同情发情及配种 | 第104页 |
1.2.5 间接ELISA检测抗体 | 第104-105页 |
1.2.6 放免法检测繁殖激素水平 | 第105页 |
1.3 统计分析 | 第105页 |
2 结果 | 第105-109页 |
2.1 疫苗的鉴定 | 第105-106页 |
2.2 疫苗免疫对小鼠血清抗INH和抗RFRP-3 抗体阳性值(P/N值)的影响 | 第106-107页 |
2.3 疫苗免疫之后对母羊血清FSH、LH、E2和P水平的影响 | 第107-108页 |
2.4 疫苗免疫母羊后对其双羔率的影响 | 第108-109页 |
3 讨论 | 第109-111页 |
全文总结 | 第111-112页 |
创新与不足 | 第112-113页 |
参考文献 | 第113-134页 |
发表的论文 | 第134-135页 |
致谢 | 第135-136页 |