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GnIH对小鼠繁殖的调控及其分子机制和基因免疫技术研究

摘要第10-13页
Abstract第13-17页
缩略语表(Abbreviation)第18-19页
第一章 促性腺激素抑制激素及基因免疫研究进展第19-46页
    1 促性腺抑制激素研究进展第19-40页
        1.1 GnIH的结构及命名第20-22页
        1.2 GnIH神经元的分布第22-25页
        1.3 GnIH受体的特性及分布第25-27页
            1.3.1 GnIH受体的特性第25-26页
            1.3.2 GnIH受体的分布第26-27页
        1.4 GnIH的生理功能第27-33页
            1.4.1 GnIH对下丘脑的生理作用第27-30页
            1.4.2 GnIH对垂体的生理作用第30-31页
            1.4.3 GnIH对性腺的生理作用第31-33页
        1.5 GnIH的作用机制第33-35页
        1.6 GnIH对生殖激素以外激素的影响第35-36页
        1.7 GnIH对季节性繁殖及采食量的调控第36-37页
            1.7.1 GnIH对季节性繁殖的影响第36页
            1.7.2 GnIH对采食量的调控第36-37页
        1.8 GnIH的表达调控第37-40页
            1.8.1 褪黑素对GnIH的调控第37-38页
            1.8.2 应激对GnIH的调控第38-40页
    2 提高动物繁殖力的基因免疫研究进展第40-44页
        2.1 抑制素基因免疫第41-42页
        2.2 提高抑制素基因免疫效果的方法第42-44页
    3 研究的目的与意义第44-46页
第二章 GnIH对雄鼠生殖与生殖内分泌的分子调控机制研究第46-69页
    引言第46-48页
    1 材料和方法第48-57页
        1.1 材料第48-50页
            1.1.1 实验动物第48页
            1.1.2 药品第48-49页
            1.1.3 主要试剂第49页
            1.1.4 主要试剂盒第49-50页
        1.2 方法第50-57页
            1.2.1 实验动物处理第50页
            1.2.2 组织Trizol法提取RNA第50-51页
            1.2.3 第一链cDNA的合成第51页
            1.2.4 基因相对表达量分析第51-52页
            1.2.5 睾丸组织的石蜡包埋、切片第52-53页
            1.2.6 睾丸组织的HE染色第53页
            1.2.7 睾丸组织的TUNEL检测第53-54页
            1.2.8 Western blot检测目的蛋白的表达第54-57页
            1.2.9 INHB、T、LH激素的ELISA测定第57页
        1.3 数据分析第57页
    2 结果第57-65页
        2.1 不同浓度的GnIH处理对血浆INHB、T及LH浓度的影响第57-58页
        2.2 GnIH对下丘脑GnRH-I mRNA、Kiss-1mRNA及NPY mRNA表达的影响第58-59页
        2.3 GnIH对小鼠腺垂体FSH β mRNA、LH β mRNA及GnRHR mRNA表达的影响第59-60页
        2.4 GnIH对类固醇生成相关酶基因表达的影响第60-61页
        2.5 GnIH处理对调控精子生成主要因子表达的影响第61-62页
        2.6 GnIH能够引起小鼠睾丸曲细精管异常组织学变化,诱导生殖细胞凋亡第62-65页
    3 讨论第65-69页
第三章 GnIH对雌性小鼠颗粒细胞类固醇生成的影响及其调控机制研究第69-85页
    引言第69-70页
    1 材料和方法第70-75页
        1.1 材料第70-71页
            1.1.1 药品及实验动物第70页
            1.1.2 主要试剂第70-71页
            1.1.3 主要的试剂盒第71页
            1.1.4 Western blot所用抗体第71页
            1.1.5 主要仪器设备第71页
        1.2 方法第71-75页
            1.2.1 小鼠卵巢颗粒细胞分离培养第71-72页
            1.2.2 小鼠粒细胞上GPR147蛋白的检测第72页
            1.2.3 GnIH处理颗粒细胞第72页
            1.2.4 小鼠颗粒细胞总RNA的提取第72-73页
            1.2.5 第一链的合成、实时定量分析基因相对表达量及Western blot检测细胞目的蛋白的表达第73页
            1.2.6 PCR检测颗粒细胞上GPR147受体的表达第73-74页
            1.2.7 流式检测细胞凋亡第74-75页
            1.2.8 激素测定第75页
        1.3 统计分析第75页
    2 结果第75-81页
        2.1 小鼠卵巢颗粒细胞上GPR147的表达检测第75-78页
        2.2 不同剂量小鼠GnIH处理对类固醇合成酶相关基因及FSHR基因表达的影响第78-79页
        2.3 Gn IH 处理对 E2,P 分泌量的影响第79页
        2.4 GnIH处理对颗粒细胞凋亡的影响第79-81页
        2.5 不同剂量的GnIH处理对颗粒细胞中p-ERK1/2 蛋白表达的影响第81页
    3 讨论第81-85页
第四章 RFRP-3 和INH α(1-32)共表达基因疫苗的构建、鉴定及其对小鼠繁殖力的影响第85-101页
    引言第86-87页
    1 材料与方法第87-94页
        1.1 材料第87-88页
            1.1.1 质粒、菌种与细胞第87页
            1.1.2 酶和试剂第87-88页
            1.1.3 实验动物第88页
            1.1.4 主要仪器设备第88页
        1.2 方法第88-94页
            1.2.1 重组质粒的构建第88-90页
            1.2.3 目的基因片段的胶回收第90-91页
            1.2.4 小提质粒DNA第91-92页
            1.2.5 重组质粒表达的鉴定第92-93页
            1.2.6 质粒大提第93页
            1.2.7 免疫小鼠第93页
            1.2.8 疫苗免疫对小鼠产仔数的评估第93页
            1.2.9 ELISA检测抗体第93-94页
        1.3 统计分析第94页
    2 结果第94-98页
        2.1 质粒的酶切鉴定第94-95页
        2.2 RT-PCR鉴定目的基因的表达第95-96页
        2.3 质粒转染HeLa细胞后的蛋白表达第96页
        2.4 疫苗免疫后对小鼠血浆抗INH抗体阳性值(P/N值)的影响第96-97页
        2.5 免疫后对小鼠抗RFRP-3 抗体阳性值(P/N值)的影响第97-98页
        2.6 免疫对小鼠产仔数的影响第98页
    3 讨论第98-101页
第五章 RFRP-3 和INHα(1-32)共表达基因疫苗对绵羊生殖激素及繁殖力的影响第101-111页
    引言第101-102页
    1 材料和方法第102-105页
        1.1 材料第102-103页
            1.1.1 质粒疫苗第102页
            1.1.2 实验动物第102页
            1.1.3 ELISA相关溶液的配制第102-103页
        1.2 方法第103-105页
            1.2.1 疫苗完整性的鉴定第103页
            1.2.2 疫苗的大量制备第103-104页
            1.2.3 免疫母羊第104页
            1.2.4 母羊的同情发情及配种第104页
            1.2.5 间接ELISA检测抗体第104-105页
            1.2.6 放免法检测繁殖激素水平第105页
        1.3 统计分析第105页
    2 结果第105-109页
        2.1 疫苗的鉴定第105-106页
        2.2 疫苗免疫对小鼠血清抗INH和抗RFRP-3 抗体阳性值(P/N值)的影响第106-107页
        2.3 疫苗免疫之后对母羊血清FSH、LH、E2和P水平的影响第107-108页
        2.4 疫苗免疫母羊后对其双羔率的影响第108-109页
    3 讨论第109-111页
全文总结第111-112页
创新与不足第112-113页
参考文献第113-134页
发表的论文第134-135页
致谢第135-136页

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