| 中文摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 英文缩略语表 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-49页 |
| 1.1 课题由来 | 第16-17页 |
| 1.2 文献综述 | 第17-48页 |
| 1.2.1 狂犬病 | 第17-20页 |
| 1.2.2 狂犬病病毒的结构特征 | 第20-21页 |
| 1.2.2.1 狂犬病病毒的形态与结构 | 第20-21页 |
| 1.2.2.2 病毒基因组特征 | 第21页 |
| 1.2.3 狂犬病毒转录与复制的研究进展 | 第21-30页 |
| 1.2.3.1 基因组起始转录信号和基因间序列 | 第21-22页 |
| 1.2.3.2 基因组末端的信号 | 第22页 |
| 1.2.3.3 病毒生活周期 | 第22-23页 |
| 1.2.3.4 病毒的转录和复制 | 第23-26页 |
| 1.2.3.5 狂犬病毒转录和复制的结构和参与转录复制的蛋白 | 第26-29页 |
| 1.2.3.6 狂犬病转录和复制细胞方面的研究 | 第29-30页 |
| 1.2.4 P蛋白的研究进展 | 第30-39页 |
| 1.2.4.1 狂犬病病毒P蛋白是多功能蛋白 | 第30-32页 |
| 1.2.4.3 P蛋白的磷酸化 | 第32-33页 |
| 1.2.4.4 P蛋白是病毒聚合酶L蛋白的辅助因子 | 第33-35页 |
| 1.2.4.5 P蛋白作为新生N蛋白的伴侣蛋白 | 第35-36页 |
| 1.2.4.6 P蛋白的自我聚合 | 第36-37页 |
| 1.2.4.7 P蛋白与细胞微管的互作 | 第37-38页 |
| 1.2.4.8 P蛋白通过影响宿主细胞干扰素的产生抑制先天性免疫反应 | 第38-39页 |
| 1.2.4.9 不同长度的狂犬病病毒P蛋白 | 第39页 |
| 1.2.5 核糖体蛋白研究进展 | 第39-44页 |
| 1.2.5.1 核糖体 | 第39-40页 |
| 1.2.5.2 核糖体蛋白 | 第40-44页 |
| 1.2.6 L9的研究进展 | 第44-48页 |
| 1.2.6.1 L9的特征 | 第44页 |
| 1.2.6.2 L9的组织分布 | 第44-45页 |
| 1.2.6.3 L9的结构 | 第45-46页 |
| 1.2.6.4 L9的功能 | 第46-48页 |
| 1.3 本课题的研究目的 | 第48-49页 |
| 第二章 材料与方法 | 第49-66页 |
| 2.1 材料 | 第49-50页 |
| 2.1.1 毒株，菌株，细胞，载体 | 第49页 |
| 2.1.2 试剂 | 第49页 |
| 2.1.3 抗体 | 第49-50页 |
| 2.1.4 仪器 | 第50页 |
| 2.1.5 其他材料 | 第50页 |
| 2.2 方法 | 第50-66页 |
| 2.2.1 P蛋白表达载体的构建及表达与纯化 | 第50-55页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第50页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第50-51页 |
| 2.2.1.3 病毒感染 | 第51页 |
| 2.2.1.4 收毒 | 第51页 |
| 2.2.1.5 RABV总RNA的提取 | 第51页 |
| 2.2.1.6 RNA处理和反转录 | 第51页 |
| 2.2.1.7 原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| 2.2.1.8 诱导表达以及产物的鉴定 | 第52-53页 |
| 2.2.1.9 目的蛋白纯化 | 第53-55页 |
| 2.2.2 噬菌体展示筛选 | 第55-57页 |
| 2.2.2.1 ELISA板的包被 | 第55页 |
| 2.2.2.2 筛选和扩增噬菌体 | 第55-56页 |
| 2.2.2.3 筛选噬菌的测序数据分析 | 第56页 |
| 2.2.2.4 备选蛋白的ELISA测定 | 第56-57页 |
| 2.2.3 P蛋白互作蛋白的鉴定 | 第57-63页 |
| 2.2.3.1 筛选的候选蛋白融合表达GST的载体构建 | 第57-58页 |
| 2.2.3.2 融合蛋白的原核表达及纯化 | 第58页 |
| 2.2.3.3 DOT-pull-down鉴定 | 第58-59页 |
| 2.2.3.5 免疫印迹实验 | 第59-60页 |
| 2.2.3.6 免疫共沉淀鉴定 | 第60页 |
| 2.2.3.7 SAD-P基因的截短及质粒构建 | 第60页 |
| 2.2.3.8 L9基因的截短质粒构建 | 第60-61页 |
| 2.2.3.9 其他真核质粒的构建 | 第61-62页 |
| 2.2.3.10原核表达蛋白的表达与纯化 | 第62页 |
| 2.2.3.11 P蛋白与L9相互作用位点的确定 | 第62页 |
| 2.2.3.12 L9与P蛋白互作的关键区域确定 | 第62页 |
| 2.2.3.13 共聚焦分析法 | 第62-63页 |
| 2.2.4 L9与P蛋白互作的生物学功能研究 | 第63-66页 |
| 2.2.4.1 rAAV-l9及rAAV-GFP病毒的包装 | 第63页 |
| 2.2.4.2 狂犬病毒荧光素酶的测定 | 第63页 |
| 2.2.4.3 病毒生长曲线的测定 | 第63-64页 |
| 2.2.4.4 间接免疫荧光实验(IFA) | 第64页 |
| 2.2.4.5 病毒滴度测定 | 第64页 |
| 2.2.4.6 直接免疫荧光 | 第64-65页 |
| 2.2.4.7 L9用siRNA敲除对病毒的影响 | 第65页 |
| 2.2.4.8 用放线菌酮(CHX)处理感染的细胞 | 第65页 |
| 2.2.4.9 荧光定量PCR | 第65页 |
| 2.2.4.10 过表达P蛋白对L9是影响 | 第65-66页 |
| 第三章 结果与分析 | 第66-84页 |
| 3.1 P蛋白的表达与纯化 | 第66-68页 |
| 3.1.1 细胞培养，病毒感染 | 第66页 |
| 3.1.2 PCR扩增P基因 | 第66-67页 |
| 3.1.3 重组质粒pET42b-P的酶切鉴定 | 第67页 |
| 3.1.4 测序结果 | 第67页 |
| 3.1.5 诱导表达及纯化 | 第67-68页 |
| 3.1.6 纯化蛋白的浓度的测定 | 第68页 |
| 3.2 RABV-P相互作用细胞蛋白基因的筛选与鉴定 | 第68-77页 |
| 3.2.1 筛选T7人脑cDNA文库的结果 | 第68-69页 |
| 3.2.2 PCR鉴定结果 | 第69页 |
| 3.2.3 PCR反应、测序及其数据分析结果 | 第69-70页 |
| 3.2.4 ELISA测定结果 | 第70-71页 |
| 3.2.5 候选蛋白融合GST标签的的表达纯化 | 第71页 |
| 3.2.6 DOT-pull-down确定SAD-P的互作蛋白L9 | 第71-72页 |
| 3.2.7 RABV P蛋白结合L9体外和体内验证 | 第72-73页 |
| 3.2.8 P蛋白的中间区域对结合L9至关重要 | 第73-75页 |
| 3.2.9 L9N末端39个氨基酸残基与P蛋白结合无关 | 第75-76页 |
| 3.2.10 RABV P蛋白招募L9从细胞核到细胞质中移动 | 第76-77页 |
| 3.3 L9与RABV-P相互作用的生物学特性研究 | 第77-84页 |
| 3.3.1 L9过表达使RABV的复制下调 | 第77-79页 |
| 3.3.2 敲除L9表达增强了RABV复制 | 第79-80页 |
| 3.3.3 L9与P的互用影响RABV的转录和复制 | 第80-82页 |
| 3.3.4 P对L9生物学特性没有显著影响 | 第82-83页 |
| 3.3.5 L9影响RABV的模型 | 第83-84页 |
| 第四章 讨论 | 第84-88页 |
| 4.1 表达纯化大量P蛋白对后续研究至关重要 | 第84页 |
| 4.2 利用噬菌体展示技术筛选得到P的互作蛋白L9 | 第84-86页 |
| 4.3 L9通过与P蛋白相互作用调控RABV的复制 | 第86-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 附录 1 | 第105-106页 |
| 个人资料 | 第105页 |
| 博士期间发表的论文 | 第105-106页 |
| 附录 2 | 第106-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
