| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌研究现状 | 第15-21页 |
| 1.1.1 禾谷镰刀菌分类及生物学性状 | 第15-16页 |
| 1.1.2 禾谷镰刀菌致病机理及产毒特性 | 第16-21页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌功能基因研究 | 第21-31页 |
| 1.2.1 随机及同源敲除方法研究基因功能 | 第22-25页 |
| 1.2.2 RNAi技术及其在基因功能研究中的应用 | 第25-30页 |
| 1.2.3 禾谷镰刀菌发育及致病基因研究现状 | 第30-31页 |
| 1.3 海藻糖合成基因研究进展 | 第31-34页 |
| 1.3.1 海藻糖合成途径的种类 | 第31-32页 |
| 1.3.2 海藻糖合成基因在生物体中的功能 | 第32-34页 |
| 1.4 几丁质合成酶基因研究进展 | 第34-36页 |
| 1.4.1 几丁质合成酶的分类 | 第34页 |
| 1.4.2 几丁质合成酶基因在生物体中的作用 | 第34-36页 |
| 1.5 乙二醛氧化酶基因研究进展 | 第36-37页 |
| 1.6 赤霉病防治研究 | 第37-40页 |
| 2 研究目的和意义 | 第40-41页 |
| 3 材料和方法 | 第41-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-50页 |
| 3.1.1 菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 小麦材料 | 第41页 |
| 3.1.3 载体材料 | 第41页 |
| 3.1.4 试剂 | 第41-48页 |
| 3.1.5 培养基配方 | 第48-50页 |
| 3.1.6 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.1.7 研究所需引物 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-66页 |
| 3.2.1 细菌操作实验方法 | 第50-52页 |
| 3.2.2 真菌操作实验方法 | 第52-53页 |
| 3.2.3 核酸及蛋白操作 | 第53-61页 |
| 3.2.4 生理生化测定 | 第61-65页 |
| 3.2.5 基因表达谱分析 | 第65页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第65-66页 |
| 4 结果与分析 | 第66-131页 |
| 4.1 禾谷镰刀菌海藻糖合成基因功能分析与鉴定 | 第66-95页 |
| 4.1.1 禾谷镰刀菌海藻糖合成基因数量及类型分析 | 第66-68页 |
| 4.1.2 基因敲除及回复载体构建 | 第68-70页 |
| 4.1.3 禾谷镰刀菌海藻糖合成基因失活及回复突变体转化子构建 | 第70-72页 |
| 4.1.4 禾谷镰刀菌海藻糖合成基因失活及回复突变体的分子鉴定 | 第72-75页 |
| 4.1.5 海藻糖及海藻糖六磷酸含量测定 | 第75-77页 |
| 4.1.6 菌丝生长及胁迫环境敏感性测定 | 第77-78页 |
| 4.1.7 无机磷酸和T6P添加对菌株表型的影响 | 第78页 |
| 4.1.8 产孢及有性生殖分析 | 第78-80页 |
| 4.1.9 细胞极性、隔膜形成、细胞核分布观察 | 第80-82页 |
| 4.1.10 菌丝细胞壁超微结构观察及几丁质含量测定 | 第82-84页 |
| 4.1.11 致病力接种鉴定 | 第84-85页 |
| 4.1.12 毒素测定 | 第85-86页 |
| 4.1.13 碳氮源利用及己糖激酶活性测定 | 第86-88页 |
| 4.1.14 基因表达谱分析 | 第88-90页 |
| 4.1.15 毒素合成相关基因的表达 | 第90-93页 |
| 4.1.16 产孢、有性生殖、细胞极性及细胞壁合成相关基因的表达 | 第93页 |
| 4.1.17 Δtps2突变体中G蛋白及其他信号途径改变 | 第93页 |
| 4.1.18 Δtps2突变体中蛋白互作和调控网络分析 | 第93-95页 |
| 4.2 禾谷镰刀菌RNA干扰体系的建立 | 第95-100页 |
| 4.2.1 禾谷镰刀菌单基因RNA干扰载体的构建 | 第95-97页 |
| 4.2.2 禾谷镰刀菌双基因RNAi载体的构建 | 第97页 |
| 4.2.3 禾谷镰刀菌双启动子RNAi载体的构建 | 第97-98页 |
| 4.2.4 禾谷镰刀菌Gateway系列载体的构建 | 第98-100页 |
| 4.3 禾谷镰刀菌几丁质合成酶Chs3b基因功能的分析鉴定 | 第100-114页 |
| 4.3.1 Chs3b基因聚类分析 | 第100-102页 |
| 4.3.2 Chs3b基因在禾谷镰刀菌与植物互作过程中的表达 | 第102-103页 |
| 4.3.3 禾谷镰刀菌Chs3b基因RNAi载体构建 | 第103-104页 |
| 4.3.4 禾谷镰刀菌Chs3b基因RNAi转化子构建 | 第104页 |
| 4.3.5 禾谷镰刀菌Chs3b基因RNAi转化子的分子鉴定 | 第104-106页 |
| 4.3.6 Chs3b基因RNA干扰效率测定 | 第106页 |
| 4.3.7 几丁质含量测定 | 第106-107页 |
| 4.3.8 菌丝生长及胁迫环境敏感性测定 | 第107-108页 |
| 4.3.9 产孢及有性生殖分析 | 第108-110页 |
| 4.3.10 孢子及菌丝形态观察 | 第110-111页 |
| 4.3.11 致病力接种鉴定 | 第111-112页 |
| 4.3.12 禾谷镰刀菌对siRNA的通透性测定 | 第112-113页 |
| 4.3.13 Chs3b用于植物RNAi的脱靶效应预测 | 第113-114页 |
| 4.4 镰刀菌单链抗体CWP2特异抗原的鉴定及其功能分析 | 第114-131页 |
| 4.4.1 Glx蛋白结构特点 | 第114-115页 |
| 4.4.2 GLX基因敲除和超表达载体的构建 | 第115页 |
| 4.4.3 镰刀菌乙二醛氧化酶基因失活和超表达转化子构建 | 第115-117页 |
| 4.4.4 镰刀菌GLX基因失活及超表达转化子的分子鉴定 | 第117-118页 |
| 4.4.5 CWP2与Glx蛋白结合western blot验证 | 第118页 |
| 4.4.6 单链抗体CWP2与Glx蛋白结合位点分析 | 第118-120页 |
| 4.4.7 CWP2抗体对Glx酶活的影响 | 第120-122页 |
| 4.4.8 Glx蛋白细胞定位 | 第122-124页 |
| 4.4.9 GLX基因在镰刀菌与小麦互作过程中的表达趋势 | 第124-125页 |
| 4.4.10 致病力接种鉴定 | 第125-128页 |
| 4.4.11 GLX基因对镰刀菌毒素合成的影响 | 第128页 |
| 4.4.12 毒素合成相关基因表达分析 | 第128-130页 |
| 4.4.13 菌丝生长及胁迫环境敏感性测定 | 第130-131页 |
| 5 讨论 | 第131-140页 |
| 5.1 影响RNAi效率的因素 | 第132-133页 |
| 5.2 RNAi中的脱靶效应 | 第133页 |
| 5.3 海藻糖合成基因功能及其在RNAi中的应用 | 第133-137页 |
| 5.4 Chs3b基因功能及其有效区段在RNAi中的应用 | 第137页 |
| 5.5 单链抗体CWP2的特异抗原Glx的功能 | 第137-140页 |
| 6 参考文献 | 第140-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
| 附录 | 第172-182页 |
| 附录 1 引物序列 | 第172-177页 |
| 附录 2 TPS1、TPS2基因突变体中与孢子形成、细胞壁合成及信号传导相关基因 | 第177-181页 |
| 附录 3 研究生期间已发表的论文及申请的专利 | 第181-182页 |
