| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 阿魏酸酯酶的概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 产FAE的微生物 | 第11页 |
| 1.1.2 FAE的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 FAE的酶学特性 | 第12-14页 |
| 1.1.4 FAE结构及其催化机制 | 第14页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第14-20页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母发展简史 | 第14-15页 |
| 1.2.2 P. pastoris的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 P. pastoris表达系统的组成 | 第16-18页 |
| 1.2.4 影响外源蛋白在P. pastoris中表达的因素及解决方法 | 第18-20页 |
| 1.3 FAE基因工程菌的研究 | 第20-22页 |
| 1.4 酶蛋白的稳定性研究 | 第22-23页 |
| 1.5 FAE的应用 | 第23-25页 |
| 1.5.1 FAE与其他酶协同降解木质纤维 | 第23-24页 |
| 1.5.2 FAE在动物饲料行业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.6 研究内容、目的及意义 | 第25-27页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第25页 |
| 1.6.2 研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 第2章 阿魏酸酯酶在毕赤酵母GS115中胞内表达 | 第27-43页 |
| 2.1 实验器材 | 第27-29页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和工具酶 | 第27页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 主要溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.2.2 培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2.2.3 目的基因的获得 | 第31页 |
| 2.2.4 重组质粒pAO815- fae的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.5 质粒转化P. pastoris GS115 | 第33-35页 |
| 2.2.6 阳性转化子的筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.7 重组基因表达检测 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.3.1 目的基因的筛选结果 | 第37-38页 |
| 2.3.2 重组质粒pAO815-fae双酶切结果 | 第38-39页 |
| 2.3.3 重组质粒pAO815-fae线性化结果 | 第39页 |
| 2.3.4 重组转化子PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| 2.3.5 GS115/pAO815-fae表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 in-reFAE粗酶液酶活性的测定结果 | 第41页 |
| 2.4 小结 | 第41-43页 |
| 第3章 阿魏酸酯酶在毕赤酵母GS115中的胞外表达 | 第43-54页 |
| 3.1 实验器材 | 第43页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和工具酶 | 第43页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 实验药品 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 主要溶液的配制 | 第43页 |
| 3.2.2 培养基的配制 | 第43-44页 |
| 3.2.3 重组质粒pPIC9K-fae的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.4 重组质粒pPIC9K-fae转化P. pastoris GS115 | 第46页 |
| 3.2.5 阳性转化子GS115/pPIC9K-fae的筛选 | 第46页 |
| 3.2.6 基因工程菌表达检测 | 第46页 |
| 3.2.7 工程菌发酵条件的优化 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第47-52页 |
| 3.3.1 重组质粒pPIC9K-fae双酶切结果 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组质粒pPIC9K-fae线性化结果 | 第48页 |
| 3.3.3 PCR验证重组转化子 | 第48-49页 |
| 3.3.4 GS115/pPIC9K-fae表达产物的SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| 3.3.5 GS115/pPIC9K-fae表达量的测定 | 第50-51页 |
| 3.3.6 表达条件优化的结果 | 第51-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-54页 |
| 第4章 重组阿魏酸酯酶酶学性质的测定 | 第54-67页 |
| 4.1 实验器材 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌种 | 第54页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第54页 |
| 4.1.3 实验药品 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 主要溶液的配制 | 第55页 |
| 4.2.2 培养基的配制 | 第55页 |
| 4.2.3 ex-reFAE粗酶液的制备 | 第55页 |
| 4.2.4 FA含量的测定 | 第55页 |
| 4.2.5 FAE酶活力的测定 | 第55-56页 |
| 4.2.6 ex-reFAE粗酶的酶学性质 | 第56页 |
| 4.2.7 稳定剂的筛选及浓度的优化 | 第56-57页 |
| 4.2.8 复合稳定剂对ex-reFAE稳定性的影响 | 第57-58页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第58-65页 |
| 4.3.1 ex-reFAE粗酶的酶学性质 | 第58-60页 |
| 4.3.2 稳定剂的筛选结果 | 第60-64页 |
| 4.3.3 添加复合稳定剂前后酶稳定性的比较 | 第64-65页 |
| 4.4 小结 | 第65-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67页 |
| 5.2 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文和研究成果 | 第78页 |
