| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第10-36页 |
| 1.1 紫杉醇的概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 紫杉醇的理化性质简介 | 第11-13页 |
| 1.1.2 紫杉醇抗癌作用及其生化机理研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.3 紫杉醇获取的途径 | 第15-18页 |
| 1.2 产紫杉醇红豆杉及其内生真菌的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.1 产紫杉醇红豆杉简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 产紫杉醇内生真菌研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 对紫杉醇产生菌遗传改造研究 | 第21-26页 |
| 1.3.1 诱变育种法 | 第22-23页 |
| 1.3.2 原生质体融合法 | 第23-24页 |
| 1.3.3 基因组重排法 | 第24-25页 |
| 1.3.4 基因工程法 | 第25-26页 |
| 1.4 紫杉醇生物合成途径及相关酶基因研究进展 | 第26-28页 |
| 1.4.1 紫杉醇生物合成途径 | 第26-27页 |
| 1.4.2 紫杉醇生物合成途径中相关酶及其基因研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 基因克隆与表达 | 第28-32页 |
| 1.5.1 常用基因克隆方法简介 | 第28-30页 |
| 1.5.2 基因的外源表达 | 第30-32页 |
| 1.6 根癌农杆菌介导的真菌遗传转化体系简介 | 第32-35页 |
| 1.6.1 根癌农杆菌介导的遗传转化真菌概述 | 第32-33页 |
| 1.6.2 根癌农杆菌介导的真菌遗传转化的应用 | 第33-35页 |
| 1.7 本研究的目的意义及主要内容 | 第35-36页 |
| 1.7.1 本研究的目的意义 | 第35页 |
| 1.7.2 本研究的主要内容 | 第35-36页 |
| 第2章 材料与方法 | 第36-64页 |
| 2.1 试验材料 | 第36-43页 |
| 2.1.1 菌株 | 第36页 |
| 2.1.2 载体 | 第36页 |
| 2.1.3 培养基 | 第36-37页 |
| 2.1.4 主要生化与分子生物学试剂 | 第37-42页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.2 试验方法 | 第43-64页 |
| 2.2.1 紫杉醇微生物合成途径中相关酶基因的克隆 | 第43-48页 |
| 2.2.2 克隆基因的测序及生物信息学分析 | 第48-52页 |
| 2.2.3 重组原核表达载体的构建与转化 | 第52-55页 |
| 2.2.4 目的基因在E.coli BL21中的诱导表达 | 第55-57页 |
| 2.2.5 目的基因与双元表达载体pBI121-43的连接 | 第57-60页 |
| 2.2.6 ATMT法构建紫杉醇高产基因工程菌株 | 第60-62页 |
| 2.2.7 HDF-68工程菌株发酵培养及紫杉醇产量检测 | 第62-64页 |
| 第3章 结果与分析 | 第64-95页 |
| 3.1 菌株总RNA的提取 | 第64页 |
| 3.2 RT-PCR法扩增目的片段的检测及分析 | 第64-65页 |
| 3.3 目的片段的测序及生物信息学分析 | 第65-76页 |
| 3.3.1 阳性克隆子的蓝白筛选 | 第65-66页 |
| 3.3.2 阳性克隆子的菌液PCR验证 | 第66-67页 |
| 3.3.3 阳性克隆子基因的测序与分析 | 第67-76页 |
| 3.4 目的片段与表达载体pET28a的连接及转化 | 第76-81页 |
| 3.4.1 测序质粒及pET28a表达载体的双酶切 | 第76-78页 |
| 3.4.2 阳性转化菌株的平板筛选 | 第78-79页 |
| 3.4.3 阳性转化菌株的酶切鉴定 | 第79-81页 |
| 3.5 目的基因的表达分析 | 第81-90页 |
| 3.5.1 重组菌株生长曲线的测定 | 第81页 |
| 3.5.2 目的基因的诱导表达及及产物检测分析 | 第81-86页 |
| 3.5.3 表达蛋白的性质及结构的生物信息学预测 | 第86-90页 |
| 3.6 紫杉醇高产基因工程菌株的构建 | 第90-93页 |
| 3.6.1 连接目的基因重组双元表达载体的双酶切 | 第90-91页 |
| 3.6.2 HDF-68阳性转化子PCR鉴定 | 第91-93页 |
| 3.7 HDF-68工程菌株发酵产紫杉醇定性定量分析 | 第93-95页 |
| 3.7.1 TLC试验结果与分析 | 第93页 |
| 3.7.2 HPLC试验结果与分析 | 第93-95页 |
| 第4章 讨论 | 第95-102页 |
| 4.1 高质量RNA的提取 | 第95页 |
| 4.2 引物设计的基本原则 | 第95-96页 |
| 4.3 利用RT-PCR方法克隆基因最佳条件的摸索 | 第96-97页 |
| 4.4 基因表达载体和系统的选择 | 第97页 |
| 4.5 外源基因在大肠杆菌中可溶性表达策略 | 第97-98页 |
| 4.6 包涵体蛋白的复性和纯化 | 第98-99页 |
| 4.7 利用根癌农杆菌介导法构建HDF-68基因工程菌株 | 第99-100页 |
| 4.7.1 适于HDF-68遗传转化的体系 | 第99-100页 |
| 4.7.2 HDF-68基因工程菌株构建的分析与意义 | 第100页 |
| 4.8 今后的工作 | 第100-102页 |
| 第5章 结论 | 第102-103页 |
| 第6章 本论文的主要创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第118-119页 |
| 攻读硕士学位期间参与的研究课题 | 第119-120页 |
