| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 研究背景 | 第11-12页 |
| 2 小麦遗传转化研究的主要方法及研究进展 | 第12-15页 |
| 2.1 遗传转化对小麦组织培养的要求 | 第12页 |
| 2.2 基因枪法转化小麦的研究进展 | 第12-13页 |
| 2.3 农杆菌介导法 | 第13-14页 |
| 2.4 其他转化方法 | 第14-15页 |
| 3 报告基因和选择标记基因在遗传转化中的应用 | 第15-22页 |
| 3.1 以bar为选择标记基因转化小麦的研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1.1 抗除草剂基因作用机理 | 第16页 |
| 3.1.2 抗除草剂转基因小麦研究 | 第16-17页 |
| 3.2 以pmi为选择标记基因转化植株的研究进展 | 第17-22页 |
| 3.2.1 PMI/甘露糖筛选体系机理及优势 | 第18页 |
| 3.2.2 影响影响甘露糖筛选体系转化效率的因素 | 第18-20页 |
| 3.2.3 氯酚红(chlorophenol red,CPR)法检测PMI转基因植株 | 第20-21页 |
| 3.2.4 甘露糖/PMI筛选体系在主要农作物中的应用 | 第21页 |
| 3.2.5 PMI标记基因的安全性评价 | 第21-22页 |
| 4 多最小表达框共转化研究进展 | 第22-23页 |
| 5 转基因小麦的应用及展望 | 第23-24页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 用于基因枪轰击的质粒及最小表达框的制备 | 第25-29页 |
| 1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第25页 |
| 1.1.1 菌株及质粒 | 第25页 |
| 1.1.2 酶和常用试剂 | 第25页 |
| 1.1.3 主要培养基及试剂 | 第25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 1.2.1 细菌培养 | 第25-26页 |
| 1.2.2 质粒DNA提取 | 第26页 |
| 1.2.3 DNA片段的制备 | 第26页 |
| 2 基因枪转化材料制备 | 第26-29页 |
| 2.1 用于基因枪轰击的最小表达框的制备 | 第26-27页 |
| 2.2 用于基因枪轰击的质粒和最小表达框组合 | 第27-29页 |
| 第三章 bar和pmi为选择标记基因的小麦幼胚基因枪转化 | 第29-56页 |
| 1 材料与方法 | 第29-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 1.1.2 主要生化试剂及工具酶 | 第29页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第29页 |
| 1.1.4 培养基和试剂配制 | 第29-31页 |
| 1.1.5 PCR引物 | 第31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-37页 |
| 1.2.1 幼胚的接种和预培养 | 第31-32页 |
| 1.2.2 愈伤组织的高渗和基因枪转化 | 第32页 |
| 1.2.3 愈伤组织的恢复培养 | 第32页 |
| 1.2.4 转基因植株的分化与筛选 | 第32-33页 |
| 1.2.5 转基因植株的生根、壮苗、春化和移栽 | 第33页 |
| 1.2.6 转化植株的鉴定 | 第33-37页 |
| 1.2.7 统计方法 | 第37页 |
| 1.2.8 T_1代材料的萌发及种植 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-50页 |
| 2.1 小麦转基因植株的获得 | 第37-39页 |
| 2.2 高渗处理及恢复培养 | 第39页 |
| 2.3 不同小麦基因型的转化率分析 | 第39-40页 |
| 2.4 叶片PPT抗性检测 | 第40-41页 |
| 2.5 氯酚红(chlorophenol red,CPR)法酶活检测 | 第41-42页 |
| 2.6 转基因植株PCR鉴定 | 第42-46页 |
| 2.7 转基因植株Southern鉴定 | 第46-48页 |
| 2.8 BAR/PPT和PMI/甘露糖筛选体系的比较 | 第48-50页 |
| 2.8.1 转化受体对不同筛选剂的反应 | 第48-49页 |
| 2.8.2 不同筛选体系筛选率及转化率分析 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-56页 |
| 3.1 基因枪介导的小麦幼胚遗传转化体系的优化 | 第50-52页 |
| 3.1.1 基因枪轰击时的影响因素 | 第51-52页 |
| 3.1.2 组织培养中的影响因素 | 第52页 |
| 3.2 BAR/PPT和PMI/甘露糖筛选体系的比较 | 第52-53页 |
| 3.3 PMI/甘露糖正向筛选体系的优化 | 第53-54页 |
| 3.4 转pmi基因植株的CPR检测 | 第54页 |
| 3.5 最小表达框共转化 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
