H5N1亚型禽流感结构蛋白基因转化小麦的研究
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-12页 |
| 1.1.1 禽流感及其危害 | 第10-11页 |
| 1.1.2 基因组及分子生物学研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 转基因植物疫苗的作用机理及转化植物的选择 | 第12-14页 |
| 1.2.1 转基因植物疫苗的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.2.2 受体植物选择 | 第13-14页 |
| 1.3 禽流感疫苗的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.3.1 灭活全病毒疫苗 | 第14页 |
| 1.3.2 基因重组亚单位疫苗 | 第14页 |
| 1.3.3 基因重组活载体疫苗 | 第14-15页 |
| 1.3.4 核酸疫苗 | 第15页 |
| 1.4.转基因小麦研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4.1 转化方法 | 第15-16页 |
| 1.4.2 小麦转基因的受体系统 | 第16-17页 |
| 1.4.3 筛选体系 | 第17-18页 |
| 1.5 转转基因疫苗存在的问题应对策略 | 第18-20页 |
| 1.5.1 安全性问题 | 第18-19页 |
| 1.5.2 转基因植物疫苗的低表达效率 | 第19页 |
| 1.5.3 少量抗原被消化降解 | 第19-20页 |
| 1.5.4 口服疫苗的免疫原性及免疫耐受性 | 第20页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与实验方法 | 第21-31页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 转化受体材料 | 第21页 |
| 2.1.3 各种酶及相关试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 幼胚转化所需培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.5 DNA提取相关试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.3.1 质粒DNA提取 | 第23页 |
| 2.3.2 DNA片段回收 | 第23-24页 |
| 2.3.3 感受态细胞制备及转化 | 第24页 |
| 2.3.4 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.5 基因枪转化及植株再生 | 第25-26页 |
| 2.3.6 小麦基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.7 叶片涂PPT | 第27页 |
| 2.3.8 液体CPR鉴定 | 第27页 |
| 2.3.9 小麦Southern杂交鉴定 | 第27-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| 3.1 植物表达载体构建 | 第31-32页 |
| 3.2 基因枪转化小麦再生过程 | 第32-38页 |
| 3.2.1 幼胚剥取及愈伤诱导 | 第32-33页 |
| 3.2.2 基因枪转化及植株再生 | 第33-34页 |
| 3.2.3 三个小麦品种诱导率、分化率比较 | 第34-35页 |
| 3.2.4 PPT筛选体系下不同品种对比研究 | 第35-36页 |
| 3.2.5 PPT筛选及PMI筛选对比研究 | 第36-38页 |
| 3.2.5.1 分化筛选阶段 | 第36-37页 |
| 3.2.5.2 生根壮苗阶段 | 第37-38页 |
| 3.4 T0代抗性植株的鉴定 | 第38-44页 |
| 3.4.1 PPT抗性检测:叶片涂PPT | 第38-39页 |
| 3.4.2 襄麦48 CPR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.3 DNA估量及PCR鉴定 | 第40-43页 |
| 3.4.5 Southern blot分析鉴定 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-48页 |
| 3.5.1 多基因共转化及标记基因剔除 | 第44页 |
| 3.5.2 提高外源蛋白的表达量 | 第44-45页 |
| 3.5.3 小麦鉴定中出现的问题 | 第45-46页 |
| 3.5.4 受体植物的选择 | 第46页 |
| 3.5.5 小麦受体材料的选择 | 第46页 |
| 3.5.6 前景及展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
