| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-17页 |
| 1 研究背景 | 第9-13页 |
| 1.1 禽流感病毒概述 | 第9-10页 |
| 1.2 禽流感疫苗的研究概况 | 第10-11页 |
| 1.3 植物生物反应器的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.4 提高外源蛋白在植物中表达的策略 | 第12-13页 |
| 1.4.1 调控元件的优化 | 第12页 |
| 1.4.2 目的基因的修饰和定位 | 第12-13页 |
| 1.4.3 受体植物的选择 | 第13页 |
| 2 基因枪转化小麦的研究进展 | 第13-16页 |
| 2.1 Bar基因的表达研究 | 第13-14页 |
| 2.2 PMI基因的表达研究 | 第14-15页 |
| 2.3 多基因共转化研究进展 | 第15-16页 |
| 3 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 相关载体构建和最小表达框制备 | 第17-21页 |
| 1 材料与方法 | 第17-18页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.1.1 菌株及质粒 | 第17页 |
| 1.1.2 酶和试剂 | 第17页 |
| 1.1.3 培养基及试剂 | 第17页 |
| 1.2 实验方法 | 第17-18页 |
| 1.2.1 质粒DNA提取 | 第17-18页 |
| 1.2.2 DNA片段回收 | 第18页 |
| 1.2.3 热激转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第18页 |
| 2 结果与分析 | 第18-21页 |
| 2.1 pLYA载体和pBAR-LYA载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2 基因枪轰击所需最小表达框的制备 | 第19-20页 |
| 2.3 用于基因枪轰击的质粒和最小表达框的总结 | 第20-21页 |
| 第三章 基因枪介导的小麦幼胚转化 | 第21-45页 |
| 1 材料与方法 | 第21-30页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 质粒及最小表达框 | 第21页 |
| 1.1.2 转化受体 | 第21页 |
| 1.1.3 培养基及试剂 | 第21-23页 |
| 1.1.3.1 小麦转化所需培养基 | 第21-23页 |
| 1.1.3.2 小麦基因组DNA提取所需试剂 | 第23页 |
| 1.1.3.3 Southern杂交试剂 | 第23页 |
| 1.1.4 引物 | 第23-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 1.2.1 幼胚的转化 | 第24-25页 |
| 1.2.1.1 幼胚的接种和培养 | 第24页 |
| 1.2.1.2 愈伤组织的高渗和转化 | 第24-25页 |
| 1.2.1.3 愈伤组织的恢复培养 | 第25页 |
| 1.2.2 幼胚愈伤组织的筛选分化及再生植株的移栽 | 第25-26页 |
| 1.2.2.1 分化阶段的筛选 | 第25页 |
| 1.2.2.2 生根阶段的筛选 | 第25页 |
| 1.2.2.3 转基因材料的生根、壮苗、春化和移栽 | 第25-26页 |
| 1.2.3 小麦转基因植株的鉴定 | 第26-30页 |
| 1.2.3.1 转基因植株的叶片PPT涂抹鉴定 | 第26页 |
| 1.2.3.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 1.2.3.3 转基因植株的Southern杂交鉴定 | 第27-30页 |
| 1.2.4 T_1代转基因材料的萌发 | 第30页 |
| 1.2.5 T_1代植株间的常规杂交 | 第30页 |
| 2 结果分析 | 第30-42页 |
| 2.1 小麦幼胚愈伤组织转化后植株再生 | 第30-31页 |
| 2.2 不同小麦基因型诱导愈伤阶段的比较 | 第31-32页 |
| 2.3 不同小麦基因型在筛选阶段的比较 | 第32-35页 |
| 2.3.1 以Bar为筛选标记的小麦筛选阶段的比较 | 第32-34页 |
| 2.3.2 以PMI为筛选标记的小麦筛选结果 | 第34-35页 |
| 2.4 叶片PPT涂抹实验 | 第35页 |
| 2.5 PCR鉴定结果 | 第35-38页 |
| 2.6 T_0代转基因植株的种植和T_1代目的基因分离情况分析 | 第38-40页 |
| 2.7 T_1代转基因植株Southern杂交鉴定 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
