| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 生物技术与生物医药的现状 | 第10-11页 |
| 1.2 糖尿病的现状和治疗药物 | 第11-12页 |
| 1.3 胰岛素的结构和性质 | 第12-15页 |
| 1.4 胰岛素药物的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 重组人胰岛素的研究 | 第16-21页 |
| 1.5.1 人胰岛素原在大肠杆菌中的表达 | 第17-18页 |
| 1.5.2 人胰岛素原在酿酒酵母中的表达 | 第18-19页 |
| 1.5.3 胰岛素原及其类似物在毕赤酵母中的表达 | 第19-20页 |
| 1.5.4 人胰岛素原在植物生物反应器中的表达 | 第20-21页 |
| 1.6 本课题的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第22-26页 |
| 2.1.1 化学与生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 抗体与分子量标记 | 第23页 |
| 2.1.4 寡核苷酸引物 | 第23-24页 |
| 2.1.5 人工合成基因 | 第24-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 BC’A 毕赤酵母表达载体的构建 | 第26-31页 |
| 2.2.2 毕赤酵母的转化 | 第31-34页 |
| 2.2.3 毕赤酵母的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.4 表达产物的Tricine-SDS-PAGE 电泳检测 | 第35-36页 |
| 2.2.5 Western Blot 检测 | 第36-37页 |
| 2.2.6 酵母表达人胰岛素原的纯化 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-46页 |
| 3.1 BC’A 毕赤酵母表达载体的构建 | 第39-43页 |
| 3.1.1 载体构建的总路线 | 第39-40页 |
| 3.1.2 PCR 扩增BC’A 基因的电泳结果 | 第40页 |
| 3.1.3 PCR 扩增产物BC’A 的回收 | 第40-41页 |
| 3.1.4 含克隆载体pMD-18T-BC’A 阳性菌株的PCR 检测 | 第41页 |
| 3.1.5 质粒pMD-18T-BC’A 的抽提和双酶切 | 第41-42页 |
| 3.1.6 表达载体pPICZαA-BC’A 的构建、转化和阳性菌株的PCR 鉴定 | 第42页 |
| 3.1.7 测序 | 第42-43页 |
| 3.2 毕赤酵母的转化 | 第43-44页 |
| 3.3 毕赤酵母的诱导表达与电泳检测 | 第44页 |
| 3.4 WESTERN BLOT 检测 | 第44-45页 |
| 3.5 BC’A 的纯化 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第46-49页 |
| 4.1 毕赤酵母表达系统的优缺点 | 第46-47页 |
| 4.2 关于TRICINE-SDS-PAGE 电泳方法 | 第47-48页 |
| 4.3 BC’A 基因在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第48页 |
| 4.4 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录一、培养基配方 | 第53-55页 |
| 附录二、TRICINE-SDS-PAGE 相关缓冲液的配制 | 第55-56页 |
| 附录三、WESTERN BLOT 相关溶液的配制 | 第56-57页 |
| 附录四、NTA-NI 相关溶液的配制 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
