| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 乙偶姻的性质及应用 | 第8页 |
| 1.2 乙偶姻的合成 | 第8-10页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第9页 |
| 1.2.2 生物转化法 | 第9-10页 |
| 1.3 乙偶姻相关代谢过程 | 第10-12页 |
| 1.3.1 乙偶姻合成代谢 | 第10-11页 |
| 1.3.2 乙偶姻和 2,3-丁二醇之间的转化 | 第11页 |
| 1.3.3 乙偶姻的代谢生理意义 | 第11-12页 |
| 1.4 谷氨酸棒状杆菌代谢特征 | 第12-13页 |
| 1.5 提高微生物合成乙偶姻的代谢工程策略 | 第13-14页 |
| 1.5.1 强化乙偶姻合成途径的相关基因 | 第13页 |
| 1.5.2 增加前体物丙酮酸的供给 | 第13-14页 |
| 1.5.3 降低乙偶姻的消耗 | 第14页 |
| 1.6 本文选题背景和主要研究内容 | 第14-17页 |
| 1.6.1 选题背景 | 第14-15页 |
| 1.6.2 本课题主要研究内容和研究意义 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-24页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第17-19页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第20-22页 |
| 2.1.4 主要溶液配置 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 菌株培养和发酵 | 第24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 谷氨酸棒状杆菌感受态的制备和转化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 大肠杆菌或谷氨酸棒状杆菌质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.5 基因组 DNA 提取 | 第27页 |
| 2.2.6 DNA 片段回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 PCR 反应体系 | 第28-29页 |
| 2.2.8 重组 PCR 反应体系 | 第29-30页 |
| 2.2.9 DNA 片段切胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.10 酶切体系 | 第31页 |
| 2.2.11 DNA 片段连接 | 第31-32页 |
| 2.2.12 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.13 目的基因敲除方法 | 第32-35页 |
| 2.2.14 菌落（菌液）PCR | 第35-36页 |
| 2.2.15 细胞内蛋白含量测定 | 第36页 |
| 2.2.16 ALS 酶活测定 | 第36-37页 |
| 2.2.17 引物设计和基因测序 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第38-62页 |
| 3.1 C. glutamicum ATCC 13032 代谢工程改造 | 第39-55页 |
| 3.1.1 乙偶姻合成支路 alsSD 操纵子的表达 | 第39-42页 |
| 3.1.2 aceE 基因敲除 | 第42-46页 |
| 3.1.3 ldhA 基因敲除 | 第46-49页 |
| 3.1.4 pqo 基因敲除 | 第49-52页 |
| 3.1.5 butA 基因敲除 | 第52-55页 |
| 3.2 工程菌株基本培养基发酵 | 第55-59页 |
| 3.2.1 CGL1 发酵结果 | 第55-56页 |
| 3.2.2 菌株 CGL2 发酵特征 | 第56-58页 |
| 3.2.3 菌株 CGL3 发酵特征 | 第58-59页 |
| 3.2.4 菌株 CGL4 发酵特征 | 第59页 |
| 3.3 摇床转速对菌株 CGL4 生产乙偶姻的影响 | 第59-61页 |
| 3.4 CGL4 丰富培养基中发酵培养 | 第61-62页 |
| 第四章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 4.1 实验主要结论 | 第62-63页 |
| 4.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
