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代谢工程方法改造谷氨酸棒状杆菌生产乙偶姻

摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
第一章 文献综述第8-17页
    1.1 乙偶姻的性质及应用第8页
    1.2 乙偶姻的合成第8-10页
        1.2.1 化学合成法第9页
        1.2.2 生物转化法第9-10页
    1.3 乙偶姻相关代谢过程第10-12页
        1.3.1 乙偶姻合成代谢第10-11页
        1.3.2 乙偶姻和 2,3-丁二醇之间的转化第11页
        1.3.3 乙偶姻的代谢生理意义第11-12页
    1.4 谷氨酸棒状杆菌代谢特征第12-13页
    1.5 提高微生物合成乙偶姻的代谢工程策略第13-14页
        1.5.1 强化乙偶姻合成途径的相关基因第13页
        1.5.2 增加前体物丙酮酸的供给第13-14页
        1.5.3 降低乙偶姻的消耗第14页
    1.6 本文选题背景和主要研究内容第14-17页
        1.6.1 选题背景第14-15页
        1.6.2 本课题主要研究内容和研究意义第15-17页
第二章 实验材料和方法第17-38页
    2.1 实验材料第17-24页
        2.1.1 菌种和质粒第17-19页
        2.1.2 主要实验仪器第19-20页
        2.1.3 实验药品第20-22页
        2.1.4 主要溶液配置第22-23页
        2.1.5 培养基第23-24页
    2.2 实验方法第24-38页
        2.2.1 菌株培养和发酵第24页
        2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第24-25页
        2.2.3 谷氨酸棒状杆菌感受态的制备和转化第25-26页
        2.2.4 大肠杆菌或谷氨酸棒状杆菌质粒的提取第26-27页
        2.2.5 基因组 DNA 提取第27页
        2.2.6 DNA 片段回收纯化第27-28页
        2.2.7 PCR 反应体系第28-29页
        2.2.8 重组 PCR 反应体系第29-30页
        2.2.9 DNA 片段切胶回收第30-31页
        2.2.10 酶切体系第31页
        2.2.11 DNA 片段连接第31-32页
        2.2.12 琼脂糖凝胶电泳第32页
        2.2.13 目的基因敲除方法第32-35页
        2.2.14 菌落(菌液)PCR第35-36页
        2.2.15 细胞内蛋白含量测定第36页
        2.2.16 ALS 酶活测定第36-37页
        2.2.17 引物设计和基因测序第37-38页
第三章 实验结果与讨论第38-62页
    3.1 C. glutamicum ATCC 13032 代谢工程改造第39-55页
        3.1.1 乙偶姻合成支路 alsSD 操纵子的表达第39-42页
        3.1.2 aceE 基因敲除第42-46页
        3.1.3 ldhA 基因敲除第46-49页
        3.1.4 pqo 基因敲除第49-52页
        3.1.5 butA 基因敲除第52-55页
    3.2 工程菌株基本培养基发酵第55-59页
        3.2.1 CGL1 发酵结果第55-56页
        3.2.2 菌株 CGL2 发酵特征第56-58页
        3.2.3 菌株 CGL3 发酵特征第58-59页
        3.2.4 菌株 CGL4 发酵特征第59页
    3.3 摇床转速对菌株 CGL4 生产乙偶姻的影响第59-61页
    3.4 CGL4 丰富培养基中发酵培养第61-62页
第四章 结论与展望第62-64页
    4.1 实验主要结论第62-63页
    4.2 展望第63-64页
参考文献第64-70页
发表论文和参加科研情况说明第70-71页
致谢第71页

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