| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 真核生物的 DNA 复制起始调控 | 第11-13页 |
| 1.1.1 真核生物 DNA 复制的特点 | 第11页 |
| 1.1.2 SV40 DNA 的复制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 真核细胞 DNA 的复制调控的机制 | 第12-13页 |
| 1.2 酿酒酵母的 ARS | 第13-16页 |
| 1.2.1 ARS 概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 ARS 的结构 | 第15页 |
| 1.2.3 酿酒酵母三号染色体上的 ARS | 第15-16页 |
| 1.2.4 ARS305 | 第16页 |
| 1.3 酵母——大肠杆菌穿梭质粒 | 第16-19页 |
| 1.3.1 酵母的 2μm 质粒 | 第16-17页 |
| 1.3.2 酵母复制型载体 | 第17-18页 |
| 1.3.3 自我复制型载体 | 第18-19页 |
| 1.4 酵母的转化 | 第19-21页 |
| 1.4.1 原生质体转化法 | 第20页 |
| 1.4.2 PEG/LiAc 转化法 | 第20-21页 |
| 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-30页 |
| 2.1 酿酒酵母的活化 | 第22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 酿酒酵母的活化方法 | 第22页 |
| 2.2 酵母基因组的提取 | 第22页 |
| 2.3 酵母 ARS305 不同长度的片段的克隆 | 第22-24页 |
| 2.3.1 ARS305-500 的克隆 | 第22-23页 |
| 2.3.2 ARS305-1000 的克隆 | 第23页 |
| 2.3.3 ARS305-2000 的克隆 | 第23-24页 |
| 2.3.4 PCR 产物的纯化 | 第24页 |
| 2.4 大肠杆菌的活化 | 第24-25页 |
| 2.4.1 实验材料与试剂 | 第24页 |
| 2.4.2 大肠杆菌的活化与培养 | 第24-25页 |
| 2.5 质粒 pRS405 的小量提取 | 第25页 |
| 2.6 ARS305 系列片段重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| 2.6.1 目的片段和载体的双酶切 | 第25-26页 |
| 2.6.2 目的片段和载体酶切后的纯化 | 第26页 |
| 2.6.3 连接反应 | 第26页 |
| 2.6.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| 2.6.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.6.6 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第27页 |
| 2.7 酵母的转化 | 第27-30页 |
| 2.7.1 酿酒酵母生长曲线的测定 | 第27-28页 |
| 2.7.2 酿酒酵母转化率的测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-39页 |
| 3.1 酵母基因组的提取 | 第30页 |
| 3.2 酵母 ARS305 不同长度的片段的克隆 | 第30-31页 |
| 3.3 大肠杆菌转化结果 | 第31-32页 |
| 3.4 质粒 pRS405 提取及单酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| 3.5 重组质粒的鉴定结果 | 第33-35页 |
| 3.5.1 重组质粒的酶切鉴定结果 | 第33-35页 |
| 3.5.2 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第35页 |
| 3.6 酵母 YPH499 转化率的测定结果 | 第35-39页 |
| 3.6.1 酵母 YPH499 生长曲线的测定结果 | 第35-36页 |
| 3.6.2 酵母 YPH499 转化率的测定结果 | 第36-38页 |
| 3.6.3 重组质粒 pRS-ARS305 系列的转化率结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录A | 第45-46页 |
| 在学研究成果 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47页 |