| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 iPSCs 的形成机制的随机模型 | 第12-13页 |
| 1.2 构建 iPSCs 的基本策略 | 第13-15页 |
| 1.3 iPSCs 构建策略的改进和安全性的提高 | 第15-17页 |
| 1.3.1 转录因子的选择使用 | 第15页 |
| 1.3.2 载体系统的改进 | 第15-17页 |
| 1.4 iPSCs 构建策略的新突破 | 第17-18页 |
| 1.4.1 使用转录因子的重组蛋白或 mRNA 重编程体细胞为 iPSCs | 第17页 |
| 1.4.2 使用 miRNAs 重编程体细胞为 iPSCs | 第17-18页 |
| 1.5 iPSCs 重编程效率的提高 | 第18-20页 |
| 1.5.1 选择合适的供体细胞和合理使用不同的转录因子 | 第18-19页 |
| 1.5.2 影响表观遗传修饰或细胞信号网络手段的作用 | 第19-20页 |
| 1.5.3 其它的一些提高 iPSCs 重编程效率的方式 | 第20页 |
| 1.6 iPSCs 研究的展望 | 第20-22页 |
| 第二章 人胎儿成纤维细胞体外培养体系的优化 | 第22-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 2.1.1 材料与仪器 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂与溶液 | 第22页 |
| 2.1.3 两种方法原代培养 hFFCs 及传代培养 | 第22-23页 |
| 2.1.4 不同培养基培养 hFFCs | 第23页 |
| 2.1.5 不同 FBS 浓度下培养 hFFCs | 第23-24页 |
| 2.1.6 含 bFGF 的培养条件培养 hFFCs | 第24页 |
| 2.1.7 hFFCs 的冷冻和复苏 | 第24页 |
| 2.1.8 数据分析 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.2.1 hFFCs 的两种方法原代培养和传代培养的结果 | 第25-26页 |
| 2.2.2 不同培养基培养对 hFFCs 生长状况的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.3 不同浓度的 FBS 对 hFFCs 生长状况的影响 | 第27-28页 |
| 2.2.4 bFGF 对 hFFCs 生长状况的影响 | 第28-29页 |
| 2.2.5 hFFCs 的冷冻和复苏 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 pEYK·E4 逆转录病毒颗粒的制备及转染条件的优化 | 第32-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 3.1.1 材料与仪器 | 第32页 |
| 3.1.2 试剂与溶液 | 第32-33页 |
| 3.1.3 感受态细胞的制备和质粒的转化、提取 | 第33页 |
| 3.1.4 重组逆转录病毒载体 pEYK·E4 的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.5 293T 细胞的培养 | 第34-35页 |
| 3.1.6 磷酸钙法制备逆转录病毒颗粒和转染条件的优化 | 第35-36页 |
| 3.1.7 使用 LipoD293~(TM) (Ver.II)脂质体制备逆转录病毒颗粒 | 第36页 |
| 3.1.8 逆转录病毒颗粒滴度的测定 | 第36页 |
| 3.1.9 数据分析 | 第36-37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.2.1 重组逆转录病毒载体 pEYK·E4 的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.2 磷酸钙法制备逆转录病毒颗粒和转染条件的优化 | 第39-42页 |
| 3.2.3 使用 LipoD293~(TM) (Ver.II)脂质体制备的逆转录病毒颗粒 | 第42-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 饲养层制备条件的优化和逆转录病毒颗粒感染hFFCs 的实验 | 第46-54页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 4.1.1 材料与仪器 | 第46页 |
| 4.1.2 试剂与溶液 | 第46-47页 |
| 4.1.3 MEFs 的原代培养、传代培养 | 第47页 |
| 4.1.4 饲养层细胞的制备 | 第47-48页 |
| 4.1.5 逆转录病毒颗粒感染 hFFCs 的实验 | 第48页 |
| 4.1.6 数据分析 | 第48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.2.1 MEFs 的原代培养和传代培养 | 第48-49页 |
| 4.2.2 制备饲养层细胞的条件的优化 | 第49-51页 |
| 4.2.3 逆转录病毒颗粒感染后 hFFCs 的变化 | 第51-52页 |
| 4.3 讨论 | 第52-53页 |
| 4.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 A 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 附录 B 溶液配制方法 | 第62-64页 |
| 附录 C pEYK·E4 测序及序列比对结果 | 第64-70页 |
| 在学研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
