| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 文献综述 | 第17-58页 |
| 第一章 牛传染性鼻气管炎及其检测技术研究进展 | 第17-31页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的病原学 | 第17-20页 |
| ·牛传染性鼻气管炎概况 | 第17页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的流行历史和分类地位 | 第17页 |
| ·病毒粒子结构、形态及理化特性 | 第17-18页 |
| ·培养特性和致病性 | 第18页 |
| ·IBRV 的基因组结构 | 第18页 |
| ·IBRV 基因组编码的主要蛋白 | 第18-20页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的流行病学 | 第20-22页 |
| ·流行历史和分布 | 第20页 |
| ·易感动物和传播途径 | 第20-21页 |
| ·临床症状 | 第21页 |
| ·致病机理 | 第21-22页 |
| ·血清型 | 第22页 |
| ·免疫 | 第22页 |
| ·牛传染性鼻气管炎病的防控 | 第22-23页 |
| ·弱毒苗 | 第22-23页 |
| ·灭活苗 | 第23页 |
| ·新型疫苗 | 第23页 |
| ·牛传染性鼻气管炎检测技术研究进展 | 第23-31页 |
| ·血清学检测 | 第23-26页 |
| ·IBRV 亚型鉴别 | 第26页 |
| ·病原鉴定 | 第26-31页 |
| 第二章 牛病毒性腹泻及其检测技术研究进展 | 第31-49页 |
| ·牛病毒性腹泻病原学 | 第31-36页 |
| ·牛病毒性腹泻概况 | 第31页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的分类地位 | 第31页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒粒子形态结构及理化特性 | 第31-32页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的培养特性 | 第32页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的基因组结构 | 第32-33页 |
| ·病毒蛋白及功能 | 第33-36页 |
| ·牛病毒性腹泻流行病学 | 第36-39页 |
| ·流行历史、分布 | 第36页 |
| ·传染源 | 第36页 |
| ·传播媒介 | 第36-37页 |
| ·易感动物和流行特征 | 第37页 |
| ·分子流行病学特征 | 第37-38页 |
| ·临床症状和致病机理 | 第38-39页 |
| ·牛病毒性腹泻的预防与控制 | 第39-41页 |
| ·常规疫苗 | 第40页 |
| ·新型疫苗 | 第40-41页 |
| ·牛病毒性腹泻检测技术研究进展 | 第41-49页 |
| ·血清学试验 | 第42-43页 |
| ·病原鉴定（国际贸易指定试验） | 第43-49页 |
| 第三章 生物芯片技术及其研究进展 | 第49-58页 |
| ·固相芯片 | 第49-52页 |
| ·基本概念及原理 | 第49页 |
| ·固态生物芯片制备步骤 | 第49-50页 |
| ·固态芯片的应用 | 第50-52页 |
| ·存在的问题及展望 | 第52页 |
| ·悬浮芯片 | 第52-58页 |
| ·悬浮芯片技术基本原理 | 第53-54页 |
| ·悬浮芯片技术的应用现状 | 第54-56页 |
| ·液相芯片技术的优点及存在的不足 | 第56-57页 |
| ·前景和展望 | 第57-58页 |
| 试验研究 | 第58-141页 |
| 第四章 新疆地区牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测 | 第58-66页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·病毒、样品和菌种 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·酶联免疫吸附试验检测 | 第59-60页 |
| ·病毒中和试验（VN） | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·不同地区IBRV 血清抗体检测结果 | 第61-62页 |
| ·两种试剂盒检测比较 | 第62页 |
| ·病毒TCID50 的测定 | 第62页 |
| ·ELISA 法与病毒中和试验比较 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第五章 牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量 PCR 检测方法的建立与应用 | 第66-86页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·病毒、样品和菌种 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·引物和探针的设计合成 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-75页 |
| ·DNA 提取 | 第67-69页 |
| ·目标模板的制备 | 第69-72页 |
| ·内标模板的制备 | 第72页 |
| ·不含内标的荧光PCR 反应条件建立 | 第72-73页 |
| ·内标共扩增荧光定量PCR 反应体系建立 | 第73-75页 |
| ·结果 | 第75-81页 |
| ·目标模板的制备 | 第75-76页 |
| ·内标模板的构建 | 第76页 |
| ·单重荧光PCR 反应条件建立 | 第76-77页 |
| ·共扩增检测低限的测定 | 第77-78页 |
| ·标准曲线的建立 | 第78-79页 |
| ·方法的特异性、重复性检测 | 第79页 |
| ·方法的灵敏度比较 | 第79-81页 |
| ·方法的应用 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-85页 |
| ·PCR 法是检测牛精液中IBRV 的良好方法 | 第81-82页 |
| ·牛精液中抑制PCR 扩增成分的研究与去除 | 第82-83页 |
| ·内标在荧光PCR 检测中的作用 | 第83页 |
| ·本研究内标荧光PCR 体系的构建 | 第83-84页 |
| ·内标限量的确定 | 第84页 |
| ·关于精液带毒与血清抗体关系的分析 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第六章 新疆地区牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测 | 第86-93页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·病毒、样品和菌种 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-88页 |
| ·酶联免疫吸附试验检测 | 第86-87页 |
| ·中和试验（VN）对血清抗体效价的检测 | 第87-88页 |
| ·结果 | 第88-91页 |
| ·ELISA 法对不同地区BVDV 抗体检测结果 | 第88-89页 |
| ·病毒TCID50 的测定 | 第89页 |
| ·ELISA 法与病毒中和试验比较 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第七章 牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定与同源性分析 | 第93-103页 |
| ·材料 | 第93-94页 |
| ·病毒、样品和菌种 | 第93页 |
| ·试剂 | 第93页 |
| ·主要仪器 | 第93-94页 |
| ·引物的设计与合成 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-96页 |
| ·酶联免疫吸附试验对血清抗原的检测 | 第94-95页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第95页 |
| ·分离毒株RT-PCR 检测鉴定 | 第95-96页 |
| ·分离毒株测序及序列分析 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-101页 |
| ·病毒分离 | 第96页 |
| ·分离株TCID50 的测定 | 第96页 |
| ·分离毒株病毒中和试验结果 | 第96-97页 |
| ·分离毒株RT-PCR 检测结果 | 第97页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第97-98页 |
| ·测序鉴定及同源性分析 | 第98-100页 |
| ·核苷酸序列同源性比较 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101页 |
| ·小结 | 第101-103页 |
| 第八章 牛病毒性腹泻病毒荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立与应用 | 第103-111页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·病毒、样品和菌种 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103-104页 |
| ·主要仪器 | 第104页 |
| ·引物、探针的设计与合成 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-106页 |
| ·RNA 提取 | 第104-105页 |
| ·荧光RT-PCR 扩增条件的优化 | 第105页 |
| ·方法的特异性、重复性检测 | 第105-106页 |
| ·方法的灵敏度检测 | 第106页 |
| ·方法的应用 | 第106页 |
| ·结果 | 第106-109页 |
| ·荧光RT-PCR 反应条件的优化 | 第106页 |
| ·方法的特异性和重复性 | 第106-108页 |
| ·方法的检测灵敏度比较 | 第108页 |
| ·方法的应用 | 第108-109页 |
| ·讨论 | 第109-110页 |
| ·小结 | 第110-111页 |
| 第九章 IBRV、BVDV 和 N.caninum 基因芯片检测方法的建立与应用 | 第111-126页 |
| ·材料与方法 | 第111-112页 |
| ·病毒、样品 | 第111页 |
| ·主要试剂 | 第111页 |
| ·主要仪器设备 | 第111-112页 |
| ·方法 | 第112-115页 |
| ·模板的制备 | 第112页 |
| ·引物、探针的设计与合成 | 第112-113页 |
| ·目的基因片段PCR 的扩增 | 第113页 |
| ·目的基因克隆与阳性质粒构建 | 第113页 |
| ·芯片的制备 | 第113-114页 |
| ·芯片杂交及结果判读 | 第114页 |
| ·杂交条件的优化 | 第114-115页 |
| ·芯片特异性检测 | 第115页 |
| ·芯片敏感性检测 | 第115页 |
| ·芯片重复性试验 | 第115页 |
| ·方法的应用 | 第115页 |
| ·结果 | 第115-123页 |
| ·目的基因PCR 扩增结果 | 第115-116页 |
| ·目的基因阳性质粒的制备与鉴定 | 第116页 |
| ·芯片制备结果 | 第116-117页 |
| ·寡核苷酸探针杂交结果 | 第117页 |
| ·反应条件优化 | 第117-121页 |
| ·特异性试验 | 第121页 |
| ·芯片检测的敏感性 | 第121-123页 |
| ·重复性试验 | 第123页 |
| ·方法的应用 | 第123页 |
| ·讨论 | 第123-124页 |
| ·基因芯片技术是一种高通量鉴定手段 | 第123页 |
| ·特异性是基因芯片的关键 | 第123-124页 |
| ·基因芯片制备中样品荧光标记方法 | 第124页 |
| ·影响芯片杂交信号的因素 | 第124页 |
| ·小结 | 第124-126页 |
| 第十章 IBRV、BVDV 和 N. caninum 悬浮芯片检测方法的建立与应用 | 第126-141页 |
| ·材料与方法 | 第126-128页 |
| ·病毒、样品 | 第126页 |
| ·主要试剂 | 第126页 |
| ·xMAP 液态芯片检测中用的主要缓冲液及其配置 | 第126-128页 |
| ·主要仪器设备 | 第128页 |
| ·方法 | 第128-131页 |
| ·模板的制备 | 第128页 |
| ·引物、探针的设计与合成 | 第128页 |
| ·目的基因片段PCR 的扩增及重组质粒的构建 | 第128-129页 |
| ·探针与微球的耦联 | 第129页 |
| ·探针交联效率的验证 | 第129-130页 |
| ·杂交并检测 | 第130-131页 |
| ·悬浮芯片杂交条件的优化 | 第131页 |
| ·特异性试验 | 第131页 |
| ·敏感性试验 | 第131页 |
| ·重复性试验 | 第131页 |
| ·方法的应用 | 第131页 |
| ·结果 | 第131-139页 |
| ·目的基因的单重和多重PCR 扩增及重组质粒的获得 | 第131-132页 |
| ·色标微球上交联探针的确证 | 第132-133页 |
| ·悬浮芯片杂交条件的优化结果 | 第133-134页 |
| ·xMAP 悬浮芯片对3 种病原单重PCR 扩增和多重PCR 扩增检测 | 第134-135页 |
| ·特异性试验 | 第135页 |
| ·敏感性试验 | 第135-137页 |
| ·重复性试验 | 第137-138页 |
| ·方法的应用 | 第138页 |
| ·悬浮芯片技术的应用 | 第138-139页 |
| ·讨论 | 第139-140页 |
| ·引物和探针的设计是基因芯片的关键 | 第139页 |
| ·芯片制备的质量控制是悬浮芯片技术的主要保证 | 第139-140页 |
| ·杂交条件的优化 | 第140页 |
| ·小结 | 第140-141页 |
| 结论 | 第141-142页 |
| 创新点和今后的研究思路 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 作者简介 | 第158-159页 |
