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DHV-Ⅰ感染性分子克隆的建立及其衍生病毒的生物学特性研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-15页
文献综述第15-51页
 第一章 鸭Ⅰ型肝炎病毒研究进展第15-27页
   ·病原研究第15-17页
     ·病原形态学特性第15-16页
     ·病毒的培养增殖第16页
     ·病毒的纯化第16-17页
   ·DHV-Ⅰ基因组结构与功能第17-20页
     ·DHV-Ⅰ基因组非编码区第18-19页
     ·DHV-Ⅰ的编码区第19-20页
   ·致病机理第20-22页
   ·DHV-Ⅰ病原检测第22-24页
     ·血清学第22-23页
     ·免疫学第23-24页
     ·分子生物学方法第24页
   ·防控方法第24-25页
   ·研究方向与前景第25-27页
 第二章 RNA 病毒的反向遗传操作研究研究进展第27-51页
   ·感染性CDNA 克隆的构建基础第27-32页
     ·病毒基因组全长cDNA 分子的扩增第28-31页
     ·载体的选择第31-32页
     ·RNA 聚合酶系统的选择第32页
     ·全长cDNA 分子的装配过程第32页
   ·感染性转录物的产生第32-34页
   ·影响感染性的因素第34-35页
     ·转录物异质性第34页
     ·基因突变第34页
     ·5′端和3′端冗余序列第34页
     ·帽子结构第34-35页
     ·VPg第35页
   ·感染性分子克隆的应用第35-43页
     ·病毒基因组结构与功能的研究第35-37页
     ·分子致病机理的研究第37-39页
     ·病毒与宿主互作的研究第39-40页
     ·新型疫苗的研究第40-42页
     ·病毒载体的研究第42-43页
     ·基因治疗第43页
   ·RNA 病毒感染性克隆构建的国内外研究进展第43-49页
     ·正链RNA 病毒感染性克隆研究进展第44-46页
     ·负链RNA 病毒感染性克隆研究进展第46-47页
     ·双链RNA 病毒感染性克隆研究进展第47-48页
     ·逆转录病毒感染性克隆研究进展第48-49页
   ·研究方向与前景第49-51页
试验研究第51-101页
 第三章 鸭Ⅰ型肝炎病毒ZJ-V/2006 在BHK-21 细胞上的分离与鉴定第51-59页
   ·材料与方法第51-55页
     ·材料第51-52页
     ·方法第52-55页
   ·结果第55-58页
     ·病毒分离第55-56页
     ·电镜观察第56页
     ·间接免疫荧光试验第56-57页
     ·RT-PCR 鉴定第57页
     ·序列分析第57-58页
   ·讨论第58-59页
 第四章 鸭Ⅰ型肝炎病毒(ZJ-V/2006)基因组全长CDNA 克隆的构建与分析第59-72页
   ·材料与方法第59-68页
     ·材料第59-60页
     ·方法第60-68页
   ·结果与分析第68-70页
     ·DHV-ⅠZJ-V/2006 株全长cDNA 序列各片段的RT-PCR 扩增第68页
     ·DHV-ⅠZJ-V/2006 株全长cDNA 的构建与鉴定第68-69页
     ·序列分析第69-70页
   ·讨论第70-72页
 第五章 DHV-Ⅰ感染性克隆病毒的体外拯救与鉴定第72-83页
   ·方法与材料第72-78页
     ·材料第72-73页
     ·方法第73-75页
     ·拯救病毒的鉴定第75-78页
   ·结果第78-81页
     ·体外转录物RNA 完整性检测结果第78页
     ·拯救病毒的鉴定第78-81页
   ·讨论第81-83页
 第六章 DHV-Ⅰ感染性克隆衍生病毒在BHK-21 细胞中的生物学特性研究第83-92页
   ·材料第83-84页
     ·质粒、细胞株及毒株第83页
     ·主要试剂第83页
     ·主要仪器与设备第83-84页
   ·方法第84-87页
     ·BHK-21 细胞的培养与冻存第84页
     ·DHV-Ⅰ拯救病毒的传代第84-85页
     ·DHV-Ⅰ拯救病毒与母本病毒TCID50 的测定第85页
     ·DHV-Ⅰ拯救病毒动力学特性第85-87页
     ·拯救病毒与母本病毒毒力的测定第87页
   ·结果第87-91页
     ·DHV-Ⅰ亲本毒和拯救病毒的动力学特性第87-88页
     ·实时荧光定量RT-PCR 结果第88-90页
     ·拯救病毒的攻毒试验结果第90-91页
   ·讨论第91-92页
 第七章 鸭Ⅰ型肝炎病毒SYBR GREENⅠ实时荧光PCR 鉴别方法第92-101页
   ·材料与方法第92-95页
     ·毒株与细胞第92页
     ·试剂第92页
     ·引物的设计与合成第92-93页
     ·标准品质粒的构建与鉴定第93页
     ·病毒TCID50 的测定第93-94页
     ·病毒RNA 的提取及反转录第94页
     ·SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR 反应体系的建立及优化第94页
     ·标准曲线的制作第94-95页
     ·特异性试验第95页
     ·重复性试验第95页
     ·敏感性试验第95页
     ·临床样品的检测第95页
   ·结果第95-99页
     ·荧光定量PCR 引物的特异性第95-96页
     ·SYBR Green ⅠPCR 的优化第96页
     ·标准曲线的绘制第96-97页
     ·SYBR Green ⅠPCR 的敏感性试验第97-98页
     ·SYBR Green ⅠPCR 的特异性试验第98-99页
     ·SYBR GreenⅠPCR 的重复性试验第99页
     ·对病料样品的检测第99页
   ·讨论第99-101页
结论第101-102页
参考文献第102-115页
缩略词第115-117页
致谢第117-118页
作者简介第118页

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