| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 Ras 蛋白的研究进展 | 第13-21页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 Ras 蛋白超家族 | 第13-16页 |
| ·Rho 亚族 | 第14页 |
| ·Rab 亚族 | 第14-15页 |
| ·Arf-Sar 家族 | 第15页 |
| ·Ran 亚族 | 第15-16页 |
| ·Ras 亚族 | 第16页 |
| ·Ras 超家族的其他亚族 | 第16页 |
| 2 Ras 的研究进展 | 第16-20页 |
| ·Ras 信号传导通路 | 第16-19页 |
| ·Ras 与癌变 | 第19-20页 |
| 3 Ras 研究的前景展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 实验目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| ·目的蛋白的表达与功能分析 | 第22页 |
| ·目的蛋白表达情况分析 | 第22-23页 |
| 第三章 序列分析 | 第23-29页 |
| 1 生物信息学工具 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-24页 |
| ·Bras1 基因的获得 | 第23页 |
| ·Bras1 基因的序列分析 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| ·Bras1 基因的序列 | 第24-25页 |
| ·Bras1 蛋白的二级结构分析 | 第25页 |
| ·疏水性分析 | 第25页 |
| ·Bras1 蛋白高级结构的预测 | 第25-26页 |
| ·Bras1 蛋白定位的预测 | 第26页 |
| ·Bras1 蛋白的同源性分析 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第四章 Bras1 基因克隆与原核表达 | 第29-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-32页 |
| 2 方法 | 第32-37页 |
| ·Bras1 基因的克隆 | 第32-36页 |
| ·Bras1 基因序列的测定 | 第36页 |
| ·E.coli BL21(DE3)感受态的制备 | 第36页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒在工程菌中的表达 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| ·PCR 扩增完整的ORF 序列 | 第37页 |
| ·重组质粒pET-28a-Bras1 的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第38页 |
| ·重组质粒在工程菌中的诱导表达 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 融合蛋白的纯化与活性检测 | 第40-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| ·表达菌株的破碎 | 第43页 |
| ·融合蛋白的样品制备 | 第43页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的复性 | 第44页 |
| ·融合蛋白的活性检测 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-47页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·Bras1 水解GTP 的时间进程. | 第46-47页 |
| ·Bras1 水解GTP 的浓度依赖. | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第六章 抗体制备与检测 | 第49-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| ·抗体的制备 | 第52页 |
| ·抗体的效价测定 | 第52-53页 |
| ·Western blot 检测 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-54页 |
| ·抗体的效价测定 | 第53-54页 |
| ·Western blot 检测 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第七章 组织定位 | 第56-60页 |
| 1 材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·试剂的配制 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第57页 |
| ·Western blot 检测Bras1 蛋白的分布 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58页 |
| ·家蚕发育过程中Bras1 蛋白表达量的变化 | 第58页 |
| ·五龄幼虫各组织中Bras1 表达量的测定 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第八章 Bras1 的亚细胞定位和功能研究 | 第60-67页 |
| 1. 材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·试剂配制 | 第60-61页 |
| 2. 方法 | 第61-63页 |
| ·细胞培养 | 第61页 |
| ·亚细胞定位 | 第61-62页 |
| ·MTT 检测BmN 细胞活性 | 第62页 |
| ·检测Bras1 膜结合能力对BmN 细胞增殖的影响 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-66页 |
| ·Cy3 标记联合DAPI 的定位结果 | 第63-64页 |
| ·MTT 检测细胞BmN 活性 | 第64页 |
| ·间接法ELISA 检测细胞内Bras1 蛋白的表达量 | 第64-65页 |
| ·流式细胞仪检测BmN 细胞中与膜结合的Bras1 蛋白的表达量测定 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
