| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1. 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 根结线虫危害与防治 | 第11-13页 |
| 1.1.1 根结线虫危害分布 | 第11-12页 |
| 1.1.2 生物防治研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.3 角质蛋白酶在防治根结线虫方面的可行性 | 第13页 |
| 1.2 角质蛋白酶产生菌及其酶基因研究 | 第13-14页 |
| 1.2.1 角质蛋白酶研究的可行性 | 第13页 |
| 1.2.2 角质蛋白酶产生菌的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 角质蛋白酶结构特征以及降解机理 | 第14页 |
| 1.3 实验室角质蛋白酶产生菌发酵酶活比较 | 第14-16页 |
| 1.4 基于土壤宏基因组文库的角质蛋白酶基因挖掘 | 第16-17页 |
| 1.4.1 土壤宏基因组文库活性物质筛选 | 第16-17页 |
| 1.4.2 角质酶产生菌在植物病害防治方面的可行性分析 | 第17页 |
| 1.5 角质酶降解菌在生防应用中可能存在的问题和拟解决方案 | 第17-18页 |
| 1.6 角质蛋白酶产生菌对植物病害防治展望 | 第18页 |
| 1.7 角质蛋白酶在生物防治方面的研究意义 | 第18-19页 |
| 1.8 本课题研究目的、意义和主要内容 | 第19-20页 |
| 2. 象耳豆根结线虫二龄幼虫侵染能力测定 | 第20-27页 |
| 2.1 主要实验材料、仪器和方法 | 第20-22页 |
| 2.1.1 供试材料、试剂和仪器 | 第20页 |
| 2.1.2 象耳豆根结线虫的培养、保存和孵化 | 第20页 |
| 2.1.3 本实验路线图 | 第20-21页 |
| 2.1.4 象耳豆根结线虫获取 | 第21-22页 |
| 2.1.5 接种数量对不同番茄品种生长的影响 | 第22页 |
| 2.1.6 各品种番茄病害等级鉴定 | 第22页 |
| 2.1.7 数据记录及处理方法 | 第22页 |
| 2.2 结果和分析 | 第22-25页 |
| 2.2.1 接种数量对不同品种平均株高和鲜质量的影响 | 第22-23页 |
| 2.2.2 接种数量在不同品种根部产生的影响 | 第23-25页 |
| 2.2.3 接种浓度对株高的影响 | 第25页 |
| 2.2.4 不同番茄品种抗性鉴定 | 第25页 |
| 2.3. 讨论 | 第25-27页 |
| 3. 根围微生物宏基因组Fosmid文库构建、特征分析和蛋白酶基因筛选 | 第27-37页 |
| 3.1 主要实验材料、仪器和方法 | 第27-32页 |
| 3.1.1 供试材料、试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 3.1.2 实验路线图 | 第28页 |
| 3.1.3 土壤样品理化性质 | 第28-29页 |
| 3.1.4 土壤DNA提取、检测和文库构建过程 | 第29-30页 |
| 3.1.5 插入片段大小检测 | 第30-31页 |
| 3.1.6 克隆稳定性检测 | 第31页 |
| 3.1.7 文库中包含的微生物物种多样性检测 | 第31页 |
| 3.1.8 超级池和二级池的构建 | 第31页 |
| 3.1.9 文库筛选 | 第31-32页 |
| 3.1.10 Fosmid克隆发酵液杀线虫室内生物测定 | 第32页 |
| 3.1.11 数据处理 | 第32页 |
| 3.2 结果与分析 | 第32-36页 |
| 3.2.1 DNA提纯 | 第32页 |
| 3.2.2 文库插入片段鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 克隆的稳定性检测 | 第33页 |
| 3.2.4 文库空载率 | 第33-34页 |
| 3.2.5 蛋白酶基因筛选结果 | 第34页 |
| 3.2.6 含蛋白酶基因的Fosmid克隆杀线虫室内生物测定 | 第34-36页 |
| 3.3 讨论 | 第36-37页 |
| 4. 克隆子21fa6发酵初探和室内活性测定 | 第37-46页 |
| 4.1 主要实验材料、仪器和方法 | 第37-41页 |
| 4.1.1 供试材料、试剂和仪器 | 第37-38页 |
| 4.1.2 实验路线图 | 第38-39页 |
| 4.1.3 摇床转数和温度对21fa6克隆子活化培养影响 | 第39页 |
| 4.1.4 诱导条件对克隆子21fa6产蛋白酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 4.1.5 克隆子21fa6不同诱导条件发酵液蛋白含量变化 | 第40页 |
| 4.1.6 克隆子21fa6发酵液杀线虫室内生物测定 | 第40-41页 |
| 4.1.7 结果统计和数据分析方法 | 第41页 |
| 4.2 结果与分析 | 第41-45页 |
| 4.2.1 摇床转速和温度对菌种活化的影响 | 第41页 |
| 4.2.2 诱导条件对产酶活的影响 | 第41-43页 |
| 4.2.3 利用SAS9.1.3软件方差分析 | 第43页 |
| 4.2.4 克隆子21fa6发酵液处理象耳豆根结线虫 | 第43-45页 |
| 4.3 讨论 | 第45-46页 |
| 5. 亚克隆构建、筛选和杀线虫测定 | 第46-53页 |
| 5.1 主要实验材料、仪器和方法 | 第46-49页 |
| 5.1.1 供试材料、试剂和仪器 | 第46页 |
| 5.1.2 实验路线图 | 第46-47页 |
| 5.1.3 引物 | 第47页 |
| 5.1.4 亚克隆文库的构建 | 第47-48页 |
| 5.1.5 亚克隆构建与筛选 | 第48页 |
| 5.1.6 活性亚克隆杀线虫室内生物测定 | 第48-49页 |
| 5.1.7 序列测定、序列分析 | 第49页 |
| 5.1.8 结果统计和数据分析方法 | 第49页 |
| 5.2 结果与分析 | 第49-52页 |
| 5.2.1 亚克隆与筛选 | 第49-50页 |
| 5.2.2 蛋白酶杀线虫室内生物测定 | 第50-51页 |
| 5.2.3 序列测定、序列分析 | 第51-52页 |
| 5.3 讨论 | 第52-53页 |
| 6. 结论 | 第53页 |
| 7. 有待进一步研究之处 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 缩略表 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
