| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 大肠杆菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 大肠杆菌的基本特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 致病性大肠杆菌 | 第11-12页 |
| 1.2 大肠杆菌对喹诺酮类药物耐药的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 喹诺酮类药物的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2.2 喹诺酮类药物的耐药现状及耐药机制 | 第13-15页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9技术的原理 | 第15-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9技术的应用 | 第18-19页 |
| 第二章 大肠杆菌GyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药相关性研究 | 第19-36页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 药敏纸片 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.2.2 菌株的复苏和纯化 | 第21页 |
| 2.2.3 药敏实验 | 第21-23页 |
| 2.2.4 核酸提取 | 第23页 |
| 2.2.5 GyrA基因突变点的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.6 基因测序 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-33页 |
| 2.3.1 菌株的复苏、纯化 | 第24页 |
| 2.3.2 药敏结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.3.3 动物源大肠杆菌GyrA基因突变的检测与分析 | 第26-28页 |
| 2.3.4 动物源大肠杆菌GyrA基因突变相应氨基酸变化结果 | 第28-30页 |
| 2.3.5 动物源大肠杆菌GyrA基因突变与喹诺酮耐药相关性分析 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 基于CRISPR/Cas9技术研究大肠杆菌GyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药性的因果关系 | 第36-54页 |
| 3.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-47页 |
| 3.2.1 培养基的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.2 利用CRISPR/Cas9对大肠杆菌标准株GyrA基因进行突变 | 第38-45页 |
| 3.2.3 利用CRISPR/Cas9对大肠杆菌临床株GyrA基因进行突变 | 第45-46页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR检测突变点 | 第46页 |
| 3.2.5 突变点测序分析 | 第46页 |
| 3.2.6 生长曲线测定 | 第46页 |
| 3.2.7 最小抑菌浓度(MIC)实验 | 第46-47页 |
| 3.2.8 药敏实验 | 第47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-52页 |
| 3.3.1 荧光定量PCR检测突变结果 | 第47-48页 |
| 3.3.2 基因测序结果 | 第48页 |
| 3.3.3 生长曲线测定结果 | 第48-49页 |
| 3.3.4 最小抑菌浓度(MIC)实验结果及分析 | 第49-50页 |
| 3.3.5 药敏实验结果及分析 | 第50-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第65-66页 |
