卵黄抗体重链恒定区介导外源蛋白在蛋黄中表达的研究
| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 鸡的生殖发育特点 | 第10-14页 |
| 1.1.1 母鸡的生殖系统 | 第10页 |
| 1.1.2 鸡蛋的特征及鸡胚发育 | 第10-13页 |
| 1.1.3 鸡的原始生殖细胞(PGCs) | 第13-14页 |
| 1.2 转基因鸡研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 转基因鸡制备技术 | 第15-17页 |
| 1.2.2 转基因鸡的检测 | 第17-18页 |
| 1.3 慢病毒载体研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 慢病毒载体的生物学特征 | 第19页 |
| 1.3.2 慢病毒载体在转基因中的应用 | 第19-20页 |
| 第二章 引言 | 第20-21页 |
| 第三章 慢病毒表达载体的构建与慢病毒的生产 | 第21-40页 |
| 3.1 材料 | 第21-23页 |
| 3.1.1 载体成分和细胞系 | 第21页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第21页 |
| 3.1.3 试剂及耗材 | 第21-22页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第22-23页 |
| 3.2 方法 | 第23-35页 |
| 3.2.1 信号肽与EGFP基因的克隆与连接 | 第23-24页 |
| 3.2.2 IgY重链恒定区基因的克隆 | 第24-26页 |
| 3.2.3 真核表达载体的构建 | 第26-29页 |
| 3.2.4 慢病毒颗粒的生产包装 | 第29-33页 |
| 3.2.5 慢病毒滴度的测定 | 第33-35页 |
| 3.2.6 慢病毒感染DF1细胞预实验 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 慢病毒载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.3.2 慢病毒滴度的测定 | 第37-38页 |
| 3.3.3 慢病毒感染DF1细胞预实验 | 第38-39页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 显微注射法制备转基因鸡 | 第40-58页 |
| 4.1 材料 | 第40-43页 |
| 4.1.1 种蛋 | 第40页 |
| 4.1.2 慢病毒载体 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 4.1.4 试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 4.1.5 试剂配制 | 第41-43页 |
| 4.2 方法 | 第43-51页 |
| 4.2.1 显微注射玻璃针的制备 | 第43-44页 |
| 4.2.2 种蛋的处理与孵化 | 第44页 |
| 4.2.3 显微注射慢病毒载体 | 第44页 |
| 4.2.4 基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| 4.2.5 PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.6 外源基因在鸡体内表达检测 | 第46-47页 |
| 4.2.7 总RNA的提取和纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.8 RT-PCR反应 | 第48页 |
| 4.2.9 细胞、组织和蛋黄中蛋白的提取 | 第48-49页 |
| 4.2.10 Western Blot检测 | 第49-51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-56页 |
| 4.3.1 胚胎孵化率统计 | 第51页 |
| 4.3.2 不同组织器官中外源蛋白表达的观测 | 第51-52页 |
| 4.3.3 血液和组织基因组DNA的PCR检测 | 第52-54页 |
| 4.3.4 RT-PCR检测 | 第54页 |
| 4.3.5 Western Blot检测 | 第54-56页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 4.4.1 显微注射慢病毒载体对鸡胚孵化的影响 | 第56页 |
| 4.4.2 显微注射慢病毒载体获得转基因鸡的效率 | 第56页 |
| 4.4.3 外源蛋白在组织器官和蛋黄中的表达 | 第56-57页 |
| 4.5 小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附图 | 第65-66页 |
