| 本论文的创新点 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第14-33页 |
| 1 唇腭裂的病理及流行病学研究概述 | 第14-18页 |
| 1.1 唇腭裂概述 | 第14-15页 |
| 1.2 唇腭裂的胚胎学发育机制 | 第15-17页 |
| 1.3 唇腭裂的病理学研究基础 | 第17-18页 |
| 2 唇腭裂的分子生物学研究进展 | 第18-31页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 8q24.21区域相关SNP位点在中国中部人群中的关联分析 | 第33-55页 |
| 1 引言 | 第33-36页 |
| 1.1 全基因组扫描(GWAS)在唇腭裂中的研究进展 | 第33-35页 |
| 1.2 常用遗传分析方法 | 第35-36页 |
| 2 材料 | 第36-37页 |
| 2.1 研究样本 | 第36-37页 |
| 2.2 主要材料,试剂及配方 | 第37页 |
| 2.3 常用仪器 | 第37页 |
| 3 方法 | 第37-40页 |
| 3.1 全血基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2 主要分析软件和常用遗传学网址 | 第38-39页 |
| 3.3 引物 | 第39-40页 |
| 4 结果 | 第40-51页 |
| 4.1 rs987525在中国中部人群NSCLP患者中关联分析 | 第40-44页 |
| 4.2 8q24.21区域新的SNP位点在中国中部人群的筛查 | 第44-51页 |
| 5 讨论 | 第51-55页 |
| 5.1 欧美人群与非综合征型唇腭裂连锁的SNP位点在中国中部人群的验证 | 第51-52页 |
| 5.2 新的SNP位点rs12546523和rs17241323在中国中部人群中的分型分析 | 第52-55页 |
| 第三章 ：8q24.21区域唇腭裂相关EST BF691581的研究 | 第55-97页 |
| 1 引言 | 第55-59页 |
| 1.1 8q24.21区域研究进展 | 第55-57页 |
| 1.2 长非编码RNA研究进展 | 第57-59页 |
| 2. 材料 | 第59-62页 |
| 2.1 主要菌种,细胞系及载体 | 第59页 |
| 2.2 主要材料,试剂及配方 | 第59-60页 |
| 2.3 常用仪器 | 第60-61页 |
| 2.4 引物 | 第61-62页 |
| 3 方法 | 第62-72页 |
| 3.1 TRIzol法组织总RNA的提取 | 第62页 |
| 3.2 逆转录制备cDNA模板 | 第62-63页 |
| 3.3 PCR产物的回收及TA克隆 | 第63页 |
| 3.4 Ca~(2+)法制备感受态细胞的制备和TA克隆的转化及鉴定 | 第63-64页 |
| 3.5 碱裂解法提取质粒 | 第64页 |
| 3.6 5'-RACE(5'-Rapid Amplification of cDNA Ends) | 第64-66页 |
| 3.7 3'-RACE(3'-Rapid Amplification of cDNA Ends) | 第66-67页 |
| 3.8 组织原位杂交实验 | 第67-69页 |
| 3.9 荧光定量PCR | 第69-70页 |
| 3.10 菌落原位杂交 | 第70-71页 |
| 3.11 Northern杂交 | 第71-72页 |
| 3.12 流式细胞仪测定细胞周期 | 第72页 |
| 4 结果 | 第72-95页 |
| 4.1 8q24.21区域已知基因与已知EST序列定位分析 | 第72-74页 |
| 4.2 8q24.21区域EST表达分析 | 第74-76页 |
| 4.3 BF691581生物信息学分析 | 第76-80页 |
| 4.4 BF691581启动子分析 | 第80-84页 |
| 4.5 BF691581全长序列的鉴定 | 第84-88页 |
| 4.6 用Northern blot方法鉴定BF691581分子大小及表达 | 第88-89页 |
| 4.7 用组织原位杂交法分析BF691581在腭部的表达情况 | 第89-91页 |
| 4.8 BF691581在唇裂伴或不伴腭裂,单纯腭裂患者以及正常样本中的荧光定量PCR | 第91-93页 |
| 4.9 BF691581对细胞周期的影响 | 第93-95页 |
| 5 讨论 | 第95-97页 |
| 5.1 8q24.21区域EST BF691581在唇部和腭部高表达 | 第95页 |
| 5.2 SNP位点rs12546523与BF691581启动子活性无关 | 第95-96页 |
| 5.3 BF691581表达谱分析 | 第96-97页 |
| 第四章 ：中国中部家系中TBX22启动子一个新突变的研究 | 第97-118页 |
| 1. 引言 | 第97-101页 |
| 1.1 TBX22研究进展 | 第97-100页 |
| 1.2 启动子分析概述 | 第100-101页 |
| 2 材料 | 第101-105页 |
| 2.1 主要菌种,细胞系及载体 | 第101-102页 |
| 2.2 主要材料,试剂及配方 | 第102-103页 |
| 2.3 常用仪器 | 第103页 |
| 2.4 引物 | 第103-105页 |
| 3 方法 | 第105-109页 |
| 3.1 冻存细胞的复苏 | 第105页 |
| 3.2 细胞培养与传代 | 第105-106页 |
| 3.3 细胞的瞬时转染 | 第106页 |
| 3.4 细胞的冻存 | 第106页 |
| 3.5 荧光素酶活性测定 | 第106-107页 |
| 3.6 EMSA电泳迁移率检测 | 第107-108页 |
| 3.7 ChIP(染色质免疫共沉淀) | 第108-109页 |
| 4 结果 | 第109-116页 |
| 4.1 唇腭裂候选基因核心启动子的构建 | 第109-111页 |
| 4.2 对已知唇腭裂候易感基因IRF6,TBX22,MSX1,BMP4以及FGF8核心启动子区域的测序分析 | 第111-112页 |
| 4.3 TBX22转录起始位点上游-73bp的G→A突变在一个三代家系中的突变分析 | 第112-113页 |
| 4.4 TBX22转录起始位点上游-73bp的G→A突变功能分析 | 第113-116页 |
| 5 讨论 | 第116-118页 |
| 5.1 家系分析 | 第116页 |
| 5.2 功能性突变G→A可能导致单纯腭裂的发生 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
