| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 植物内生真菌与紫杉木霉 | 第13-15页 |
| 1.1.1 植物内生真菌 | 第13-14页 |
| 1.1.2 紫杉木霉 | 第14-15页 |
| 1.2 木霉菌素及单端孢霉烯类化合物 | 第15-16页 |
| 1.3 Tri基因 | 第16-23页 |
| 1.3.1 镰刀菌的Tri基因 | 第17-19页 |
| 1.3.2 木霉的Tri基因 | 第19-20页 |
| 1.3.2.1 苇状木霉和短密木霉的Tri基因 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 哈茨木霉的Tri基因 | 第20页 |
| 1.3.3 露湿漆斑菌的Tri基因 | 第20-21页 |
| 1.3.4 Tri5、Tri4、Tri6、Tri3基因的功能 | 第21-23页 |
| 1.3.4.1 Tri5基因 | 第21页 |
| 1.3.4.2 Tri4基因 | 第21-22页 |
| 1.3.4.3 Tri6基因 | 第22页 |
| 1.3.4.4 Tri3基因 | 第22-23页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 基因组测序结果分析 | 第24-25页 |
| 2.1.1 紫杉木霉全基因组序列测定及拼接 | 第24页 |
| 2.1.2 紫杉木霉的Tri基因查找 | 第24页 |
| 2.1.3 紫杉木霉的Tri基因的同源对比 | 第24页 |
| 2.1.4 紫杉木霉的Tri基因的分布情况作图 | 第24-25页 |
| 2.2 试验菌株及保存、培养条件 | 第25-29页 |
| 2.2.1 真菌菌株及保存、培养条件 | 第25页 |
| 2.2.2 细菌菌株及培养条件 | 第25页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第25-29页 |
| 2.2.3.1 LB培养基 | 第26页 |
| 2.2.3.2 SOB培养基 | 第26页 |
| 2.2.3.3 PDA培养基和PDB培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.3.4 SC培养基 | 第27页 |
| 2.2.3.5 SC诱导表达培养基 | 第27页 |
| 2.2.3.6 YPD培养基 | 第27页 |
| 2.2.3.7 AIM培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.3.8 MS培养基 | 第28-29页 |
| 2.3 载体的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.1 聚合酶链反应PCR | 第29-30页 |
| 2.3.1.1 常规PCR | 第29-30页 |
| 2.3.1.2 高保真PCR | 第30页 |
| 2.3.1.3 长片段PCR | 第30页 |
| 2.3.2 DNA操作 | 第30-31页 |
| 2.3.3 质粒大肠杆菌转化 | 第31-32页 |
| 2.3.3.1 E. Coli DH5α感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.3.3.3 X-gal和IPTG用于琼脂平板 | 第32页 |
| 2.3.4 载体T-Tri的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.5 敲除载体1300-ΔTri3的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.6 互补载体1300-Tri3的构建 | 第34页 |
| 2.3.7 表达载体PYES2-g9的构建 | 第34页 |
| 2.4 紫杉木霉基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.5 紫杉木霉RNA的提取及cDNA的制备 | 第35页 |
| 2.6 紫杉木霉T-DNA转化 | 第35-37页 |
| 2.6.1 紫杉木霉对抗生素抗性临界浓度的筛选 | 第35-36页 |
| 2.6.2 农杆菌的冻融法转化 | 第36页 |
| 2.6.3 紫杉木霉ATMT | 第36-37页 |
| 2.7 RealTime-PCR | 第37页 |
| 2.8 发酵液的制备、提取、检测 | 第37页 |
| 2.9 发酵液活性检测 | 第37-38页 |
| 2.10 水稻共培养 | 第38页 |
| 2.10.1 水稻种子消毒 | 第38页 |
| 2.10.2 紫杉木霉与水稻的共培养 | 第38页 |
| 2.11 酵母中的真核表达 | 第38-40页 |
| 2.11.1 质粒转入酵母细胞 | 第38-39页 |
| 2.11.2 酵母细胞壁的破除与粗酶液的制取 | 第39-40页 |
| 第三章 紫杉木霉Tri基因簇分析 | 第40-49页 |
| 3.1 紫杉木霉基因组测序结果分析 | 第40页 |
| 3.2 紫杉木霉Tri基因的查找 | 第40-41页 |
| 3.3 紫杉木霉contig57的开放阅读框分析 | 第41-42页 |
| 3.4 紫杉木霉中Tri基因保守区分析与木霉菌素合成过程 | 第42-47页 |
| 3.5 紫杉木霉Tri基因分布 | 第47-48页 |
| 3.6 Tri基因编码序列的克隆与分析 | 第48-49页 |
| 第四章 紫杉木霉Tri3基因功能分析 | 第49-63页 |
| 4.1 紫杉木霉TtΔTri3突变菌株的获得 | 第49-53页 |
| 4.1.1 紫杉木霉对潮霉素抗性相关临界浓度的筛选 | 第49页 |
| 4.1.2 紫杉木霉ATMT转化 | 第49-51页 |
| 4.1.3 TtΔTri3菌株与野生型菌株发酵液HPLC检测 | 第51-53页 |
| 4.2 Tri3基因的回补与ΔTri3-tri3突变体的获得 | 第53-56页 |
| 4.2.1 紫杉木霉对G418抗性相关临界浓度的筛选 | 第53页 |
| 4.2.2 突变体菌株TtΔTri3-5 | 第53-54页 |
| 4.2.3 ΔTri3-tri3菌株与野生型菌株发酵液HPLC检测 | 第54-56页 |
| 4.3 突变体TtΔTri3菌落形态观察 | 第56-57页 |
| 4.4 Tri基因在突变体TtΔTri3中的表达情况 | 第57-58页 |
| 4.4.1 紫杉木霉Actin基因的查找 | 第57页 |
| 4.4.2 Tri基因表达情况 | 第57-58页 |
| 4.5 突变体TtΔTri3的发酵液活性检测 | 第58-60页 |
| 4.6 紫杉木霉野生型菌株和敲除突变体与水稻的共培养 | 第60-61页 |
| 4.8 Tri3基因在酵母中的诱导表达 | 第61-63页 |
| 第五章 讨论 | 第63-65页 |
| 5.1 小结 | 第63-64页 |
| 5.2 实验展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附表 | 第70-71页 |
