| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 概述 | 第11-17页 |
| 1.1 CRISPR-Cas系统 | 第11-13页 |
| 1.2 维吉尼亚链霉菌IBL14(streptomyces virginiae IBL14)中的次级代谢与CYP450基因 | 第13-15页 |
| 1.3 一氧化氮与瓜氨酸代谢功能 | 第15-16页 |
| 1.4 研究内容,研究意义和研究方案 | 第16-17页 |
| 第二章 S. virginiae IBL14中sviscsn基因簇鉴定与遗传分析 | 第17-23页 |
| 2.1 前言 | 第17页 |
| 2.2 材料和方法 | 第17-18页 |
| 2.2.1 菌株 | 第17页 |
| 2.2.2 分析软件和网址 | 第17-18页 |
| 2.2.3 方法 | 第18页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第18-22页 |
| 2.3.1 IBL14菌株的全基因组测序结果与注释 | 第18页 |
| 2.3.2 IBL14菌株中的sviscsn基因簇 | 第18-20页 |
| 2.3.3 IBL14中的sviscsn基因簇中的基因的进化关系 | 第20-22页 |
| 2.4 结论 | 第22-23页 |
| 第三章 I-B-svi型CRISPR-Cas系统对sviscsn基因簇的基因编辑 | 第23-66页 |
| 3.1 前言 | 第23页 |
| 3.2 材料与方法 | 第23-44页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第23-25页 |
| 3.2.2 主要试剂和实验仪器 | 第25-28页 |
| 3.2.3 培养基 | 第28-30页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.5 实验方法 | 第31-44页 |
| 3.3 svu001、svicup02、svu015、svinos01基因及sviscsn基因簇的敲除 | 第44-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-65页 |
| 3.4.1 S.virginiae IBL14菌株基因组的提取 | 第46-47页 |
| 3.4.2 基因上下游同源臂的克隆 | 第47-51页 |
| 3.4.3 基因编辑质粒的构建 | 第51-54页 |
| 3.4.4 基因编辑质粒的筛选与验证 | 第54-55页 |
| 3.4.5 svu001、svicup02、svu015、svinos01基因以及sviscsn基因簇的敲除 | 第55-60页 |
| 3.4.6 菌株IBL14敲除重组子在CGM培养集中的生长曲线 | 第60-61页 |
| 3.4.7 CGM液体培养基中菌株IBL14及其重组子在对数期菌丝体形态 | 第61-63页 |
| 3.4.8 CGM固体培养基上菌株IBL14及其重组子菌落形态 | 第63-65页 |
| 3.5 结论 | 第65-66页 |
| 第四章 sviscsn基因簇蛋白表达与功能分析 | 第66-85页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 材料和方法 | 第66-76页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第66-67页 |
| 4.2.2 主要试剂,试剂盒和试剂配制 | 第67-69页 |
| 4.2.3 培养基 | 第69-70页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第70-76页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第76-84页 |
| 4.3.1 基因的克隆 | 第76-78页 |
| 4.3.2 重组质粒的构建 | 第78-79页 |
| 4.3.3 重组子的筛选和鉴定 | 第79-80页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE检测蛋白表达以及底物的投料 | 第80-82页 |
| 4.3.5 CYP蛋白质的功能进行鉴定 | 第82-84页 |
| 4.4 结论 | 第84-85页 |
| 第五章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 5.1 结论 | 第85-86页 |
| 5.2 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 附录 | 第90-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 文章与专利 | 第94页 |
