| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第13-30页 |
| 1.1 噬菌体在畜牧生产中的应用概况 | 第13-14页 |
| 1.1.1 噬菌体在牛生产中的应用 | 第13页 |
| 1.1.2 噬菌体在羊生产中的应用 | 第13页 |
| 1.1.3 噬菌体在猪生产中的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 噬菌体在禽生产中的应用 | 第14页 |
| 1.2 噬菌体在人类医疗健康领域内的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 噬菌体在食品安全领域内的应用 | 第15-17页 |
| 1.4 噬菌体应用的安全性以及较抗生素应用的优势 | 第17-18页 |
| 1.5 噬菌体概述 | 第18-26页 |
| 1.5.1 噬菌体研究历史 | 第18-19页 |
| 1.5.2 噬菌体基因组特征及抑菌机制 | 第19-23页 |
| 1.5.2.1 噬菌体基因组特征 | 第19-20页 |
| 1.5.2.2 噬菌体抑菌机制 | 第20-21页 |
| 1.5.2.3 T5基因组特征及其抑菌机制 | 第21-23页 |
| 1.5.3 噬菌体裂解酶概述 | 第23-25页 |
| 1.5.4 噬菌体对细菌DNA的降解机制 | 第25-26页 |
| 1.6 大肠杆菌O157：H7概述 | 第26-27页 |
| 1.6.1 大肠杆菌O157：H7的发现 | 第26页 |
| 1.6.2 大肠杆菌O157：H7的生物学特性 | 第26页 |
| 1.6.3 大肠杆菌O157：H7对人类健康的危害 | 第26页 |
| 1.6.4 牛肉污染大肠杆菌O157：H7的控制策略 | 第26-27页 |
| 1.7 大肠杆菌O157：H7 O抗原翻转酶基因概述 | 第27-28页 |
| 1.7.1 大肠杆菌O157：H7 O抗原翻转酶基因功能 | 第27-28页 |
| 1.7.2 大肠杆菌O157：H7 O抗原翻转酶基因系统发生 | 第28页 |
| 1.8 PMA-qPCR概述 | 第28-29页 |
| 1.9 本研究目的、意义和主要内容 | 第29-30页 |
| 2. 研究一、应用PMA-qPCR检测噬菌体灭菌效率及不同噬菌体对大肠杆菌DNA的降解特性 | 第30-47页 |
| 2.1 实验材料及设备 | 第31-33页 |
| 2.1.1 噬菌体及菌种 | 第31页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第31页 |
| 2.1.3 试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 溶液配置 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 菌悬液的制备及浓度测定 | 第33页 |
| 2.2.2 噬菌体悬液的制备及其效价的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.3 O-抗原翻转酶基因(wzx)引物设计与合成 | 第34页 |
| 2.2.4 Real-time PCR标准品的制备 | 第34-36页 |
| 2.2.4.1 细菌基因组DNA提取 | 第34页 |
| 2.2.4.2 O抗原翻转酶基因(wzx)PCR | 第34-35页 |
| 2.2.4.3 PCR产物电泳分析 | 第35页 |
| 2.2.4.4 O抗原翻转酶基因(wzx)PCR产物的回收 | 第35页 |
| 2.2.4.5 O抗原翻转酶基因(wzx)目的片段的连接 | 第35-36页 |
| 2.2.4.6 重组质粒的转化 | 第36页 |
| 2.2.4.7 目的片段成功克隆的确认 | 第36页 |
| 2.2.4.8 标准品的定量 | 第36页 |
| 2.2.5 Real-time PCR | 第36-37页 |
| 2.2.6 细菌培养及热灭活菌的制备 | 第37页 |
| 2.2.7 PMA质量浓度优化 | 第37页 |
| 2.2.8 PMA对活细菌DNA的结合效果 | 第37-38页 |
| 2.2.9 PMA对不同比例活菌/热灭活菌的影响 | 第38页 |
| 2.2.10 比较Real-time PCR与平板计数法 | 第38页 |
| 2.2.11 PMA对噬菌体灭菌效率准确性的影响 | 第38页 |
| 2.3 数据处理 | 第38页 |
| 2.4 结果 | 第38-44页 |
| 2.4.1 O抗原翻转酶基因(wzx)PCR | 第38-39页 |
| 2.4.2 R508N O抗原翻转酶基因(wzx)Real-time PCR | 第39-41页 |
| 2.4.3 R508N检测的平板计数法和Real-time比较 | 第41页 |
| 2.4.4 不同浓度PMA对热灭活R508N基因组DNA的结合效果 | 第41-42页 |
| 2.4.5 活菌R508N对PMA的耐受性 | 第42页 |
| 2.4.6 PMA区分活菌和热灭活菌的能力 | 第42-43页 |
| 2.4.7 PMA在提升噬菌体灭菌效果准确性方面的应用 | 第43-44页 |
| 2.4.8 噬菌体对宿主DNA的降解 | 第44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-46页 |
| 2.5.1 关于实验设计的讨论 | 第44-45页 |
| 2.5.2 关于PMA-qPCR的讨论 | 第45页 |
| 2.5.3 关于PMA在提高噬菌体灭菌效率准确性方面的讨论 | 第45-46页 |
| 2.5.4 关于噬菌体对宿主DNA降解的讨论 | 第46页 |
| 2.6 小结 | 第46-47页 |
| 3 研究二、噬菌体对牛肉污染大肠杆菌O157：H7的灭菌效果 | 第47-56页 |
| 3.1 实验材料及设备 | 第47-48页 |
| 3.1.1 大肠杆菌O157：H7菌株及噬菌体 | 第47页 |
| 3.1.2 试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 仪器 | 第48页 |
| 3.1.4 溶液及培养基配置 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.2.1 菌悬液的制备 | 第48页 |
| 3.2.2 噬菌体悬液的制备 | 第48-49页 |
| 3.2.3 样品采集及处理 | 第49-50页 |
| 3.2.3.1 样品采集与O157抗原鉴定 | 第49页 |
| 3.2.3.2 大肠杆菌O157：H7和噬菌体的接种 | 第49页 |
| 3.2.3.3 杀病毒液(FeT)的制备 | 第49-50页 |
| 3.2.3.4 噬菌体灭菌效果的检测 | 第50页 |
| 3.2.3.5 牛肉上噬菌体效价检测 | 第50页 |
| 3.3 数据分析 | 第50页 |
| 3.4 结果 | 第50-53页 |
| 3.4.1 牛肉样品表面O157污染和pH值检测 | 第50页 |
| 3.4.2 温度和时间对噬菌体灭菌效果的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.3 不同噬菌体在牛肉上对大肠杆菌灭菌效果的比较 | 第51-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-56页 |
| 3.5.1 关于实验设计的讨论 | 第53页 |
| 3.5.2 温度对噬菌体灭菌效果的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.3 四种噬菌体对大肠杆菌O157：H7灭菌效果 | 第54-56页 |
| 3.6 小结 | 第56页 |
| 4 研究三：PFGE分析大肠杆菌菌株间亲缘关系 | 第56-66页 |
| 4.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 菌株 | 第57页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第57页 |
| 4.1.3 生化试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.4 主要试剂及培养基配置 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 制备细胞悬浮液 | 第58页 |
| 4.2.2 胶块制作 | 第58-59页 |
| 4.2.3 细胞裂解 | 第59页 |
| 4.2.4 胶块清洗 | 第59页 |
| 4.2.5 酶切 | 第59页 |
| 4.2.6 制胶 | 第59-60页 |
| 4.2.7 电泳 | 第60页 |
| 4.2.8 染色、成像 | 第60页 |
| 4.2.9 微孔板分析法测定突变菌株对噬菌体的敏感性研究 | 第60-61页 |
| 4.3 数据分析 | 第61页 |
| 4.4 结果 | 第61-65页 |
| 4.4.1 酶切分析 | 第61-62页 |
| 4.4.2 四种噬菌体对不同大肠杆菌O157：H7的灭菌效果 | 第62-63页 |
| 4.4.3 噬菌体对大肠杆菌O157：H7遗传突变的影响 | 第63页 |
| 4.4.4 突变菌株与接种菌株之间的亲缘关系 | 第63-64页 |
| 4.4.5 存活菌株和突变菌株对噬菌体的易感性 | 第64-65页 |
| 4.5 讨论 | 第65-66页 |
| 4.6 小结 | 第66页 |
| 5 结论以及创新点 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-87页 |
| 作者简介 | 第87页 |
