中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
1.1 MicroRNA-122的研究进展 | 第12-17页 |
1.1.1 MicroRNA的发现、生物合成和作用机制 | 第12-14页 |
1.1.2 miR-122的发现及与肝脏的联系 | 第14-16页 |
1.1.3 miR-122与肝脏疾病的联系 | 第16-17页 |
1.2 肝脏富集转录因子与miR-122的表达 | 第17-20页 |
1.2.1 几种肝脏富集转录因子 | 第17-19页 |
1.2.2 LETF调控miR-122的转录 | 第19-20页 |
1.3 VNN1的功能研究 | 第20-22页 |
1.3.1 泛酰巯基乙胺酶Vanin | 第20-21页 |
1.3.2 VNN1在脂类代谢中的功能 | 第21-22页 |
1.3.3 VNN1在免疫学方面的功能 | 第22页 |
1.4 BZW2的功能研究 | 第22-23页 |
1.5 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
第二部分 材料与方法 | 第25-48页 |
2.1 实验材料 | 第25-31页 |
2.1.1 实验动物 | 第25页 |
2.1.2 菌株、细胞系与质粒 | 第25页 |
2.1.3 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
2.1.4 实验试剂 | 第26-29页 |
2.1.5 实验引物和探针 | 第29-31页 |
2.2 实验方法 | 第31-46页 |
2.2.1 组织RNA的提取 | 第31页 |
2.2.2 5'c DNA末端快速扩增(5’RACE) | 第31-35页 |
2.2.3 启动子报告载体的构建 | 第35-39页 |
2.2.4 细胞培养和转染 | 第39页 |
2.2.5 双荧光素酶报告基因实验 | 第39-40页 |
2.2.6 凝胶电泳率迁移实验 (EMSA) | 第40-44页 |
2.2.7 miR-122靶基因的验证 | 第44页 |
2.2.8 miRNA及基因表达分析 | 第44-46页 |
2.3 生物信息学网站和生物学软件 | 第46-48页 |
第三部分 结果与分析 | 第48-68页 |
3.1 鸡miR-122基因启动子区的确定和分析 | 第48-55页 |
3.1.1 miR-122基因启动子区的生物信息学预测 | 第48-49页 |
3.1.2 鸡miR-122基因的转录起始位点和启动子区分析 | 第49-51页 |
3.1.3 鸡miR-122启动子区的验证 | 第51-55页 |
3.2 转录因子HNF3β 调控鸡miR-122的表达 | 第55-58页 |
3.2.1 HNF3β 对miR-122启动子活性的影响 | 第55-56页 |
3.2.2 HNF3β 与miR-122启动子区结合的体外验证 | 第56-58页 |
3.3 miR-122靶基因的鉴定 | 第58-61页 |
3.3.1 靶基因报告载体的构建 | 第58-60页 |
3.3.2 靶基因VNN1和BZW2的验证 | 第60-61页 |
3.4 miR-122和靶基因的表达分析 | 第61-68页 |
3.4.1 过表达miR-122的LMH细胞中靶基因的表达特征 | 第61-63页 |
3.4.2 抑制miR-122的原代鸡肝细胞中靶基因的表达分析 | 第63-65页 |
3.4.3 靶基因的组织表达特征 | 第65-66页 |
3.4.4 靶基因在不同发育时期鸡肝脏的表达特征 | 第66-68页 |
第四部分 讨论 | 第68-75页 |
4.1 鸡miR-122启动子区的预测和验证 | 第68-69页 |
4.2 肝脏富集转录因子调控miR-122的表达 | 第69-70页 |
4.3 miR-122靶基因的预测和验证 | 第70-72页 |
4.4 miR-122和靶基因的表达特征分析 | 第72-73页 |
4.5 展望 | 第73-75页 |
第五部分 结论 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-85页 |
攻读学位期间本人出版或公开发表的论文 | 第85-86页 |
附录 | 第86-91页 |
致谢 | 第91-92页 |