| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 端粒酶与细胞永生化研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1 细胞永生化 | 第13页 |
| 1.2 永生化的分子机制 | 第13-16页 |
| 1.2.1 端粒酶依赖性端粒长度维护机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 端粒酶非依赖性端粒长度维护机制 | 第15页 |
| 1.2.3 P53和PRb突变引起的细胞永生化 | 第15-16页 |
| 1.3 永生化方法 | 第16-20页 |
| 1.3.1 病毒感染法 | 第16-19页 |
| 1.3.2 端粒酶法 | 第19-20页 |
| 1.4 端粒酶与细胞衰老 | 第20-21页 |
| 1.5 端粒酶在细胞永生化中的优越性 | 第21-22页 |
| 1.6 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 睾丸间质细胞研究进展 | 第23-27页 |
| 2.1 睾丸间质细胞的分离纯化与体外培养 | 第23页 |
| 2.2 睾丸间质细胞形态观察 | 第23-24页 |
| 2.3 睾丸间质细胞睾酮合成与调节 | 第24-25页 |
| 2.4 睾丸间质细胞的发生、发育 | 第25-26页 |
| 2.4.1 胚胎型睾丸间质细胞的发育 | 第25-26页 |
| 2.4.2 成年型睾丸间质细胞的发育 | 第26页 |
| 2.5 展望 | 第26-27页 |
| 第三章 原代睾丸间质细胞的分离与培养 | 第27-33页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-28页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第27-28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 样本采集 | 第28页 |
| 3.2.2 细胞分离培养 | 第28-29页 |
| 3.2.3 山羊睾丸间质细胞的纯度鉴定 | 第29页 |
| 3.2.4 山羊睾丸间质细胞传代及纯化 | 第29页 |
| 3.2.5 山羊睾丸间质细胞的冷冻与复苏 | 第29-30页 |
| 3.2.6 山羊成纤维细胞分离培养 | 第30页 |
| 3.3 结果 | 第30-31页 |
| 3.3.1 山羊睾丸间质细胞的形态学观察 | 第30页 |
| 3.3.2 山羊睾丸间质细胞纯度鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3.3 山羊成纤维细胞体外培养 | 第31页 |
| 3.4 讨论 | 第31-32页 |
| 3.5 小结 | 第32-33页 |
| 第四章 永生化山羊睾丸间质细胞系的建立 | 第33-52页 |
| 4.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 4.1.1 睾丸间质细胞、质粒pCI-neo-hTERT | 第33页 |
| 4.1.2 主要仪器和设备 | 第33页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 4.1.4 pCI-neo-hTERT质粒的扩增 | 第34页 |
| 4.1.5 pCI-neo-hTERT质粒纯度和浓度检测 | 第34页 |
| 4.1.6 pCI-neo-hTERT质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| 4.1.7 G418最佳筛选浓度的确定 | 第35页 |
| 4.1.8 pCI-neo-hTERT质粒转染山羊睾丸间质细胞 | 第35页 |
| 4.1.9 阳性睾丸间质细胞的筛选 | 第35页 |
| 4.1.10 山羊成纤维细胞转染和阳性克隆筛选方法分别同 4.1.8 和 4.1.9 | 第35页 |
| 4.2 hTERT-GLCs的形态学观察与生物学功能检测 | 第35-39页 |
| 4.2.1 hTERT-GLCs形态学观察 | 第35页 |
| 4.2.2 hTERT-GLCs中外源hTERT基因的表达检测 | 第35-37页 |
| 4.2.3 hTERT-GLCs关键酶和受体的RT-PCR检测 | 第37页 |
| 4.2.4 GLCs和hTERT-GLCs生长曲线绘制 | 第37页 |
| 4.2.5 GLCs和hTERT-GLCs睾酮分泌能力检测 | 第37-38页 |
| 4.2.6 端粒长度检测 | 第38页 |
| 4.2.7 细胞核型分析 | 第38-39页 |
| 4.2.8 悬浮生长能力分析 | 第39页 |
| 4.2.9 细胞周期检测 | 第39页 |
| 4.2.10 统计学分析 | 第39页 |
| 4.3 结果 | 第39-49页 |
| 4.3.1 质粒pCI-neo-hTERT扩增和酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3.2 质粒pCI-neo-hTERT浓度和纯度的鉴定 | 第40页 |
| 4.3.3 G418对山羊睾丸间质细胞最佳筛选浓度的确定 | 第40页 |
| 4.3.4 转染后阳性细胞的筛选 | 第40页 |
| 4.3.5 hTERT-GLCs的形态学观察与纯度鉴定 | 第40-42页 |
| 4.3.6 hTERT基因表达检测 | 第42-44页 |
| 4.3.7 RT-PCR检测h TERT-GLCs关键酶和受体的表达 | 第44页 |
| 4.3.8 hTERT-GLCs生长曲线 | 第44-45页 |
| 4.3.9 hTERT-GLCs睾酮分泌能力的检测 | 第45-46页 |
| 4.3.10 细胞周期检测 | 第46-47页 |
| 4.3.11 软琼脂实验 | 第47页 |
| 4.3.12 染色体核型分析 | 第47-48页 |
| 4.3.13 端粒长度检测 | 第48-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.5 小结 | 第51-52页 |
| 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 缩略词 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
