| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13页 |
| 第一章 间充质干细胞的研究进展 | 第13-25页 |
| 1.1 骨髓中干细胞的分离方法 | 第14-16页 |
| 1.1.1 全骨髓贴壁培养法 | 第14页 |
| 1.1.2 密度梯度离心法 | 第14页 |
| 1.1.3 免疫磁珠分选法 | 第14页 |
| 1.1.4 流式细胞仪分选法 | 第14页 |
| 1.1.5 红细胞溶解分离法 | 第14-15页 |
| 1.1.6 趋化法分离细胞 | 第15-16页 |
| 1.2 不同来源间充质干细胞的特异性标志物 | 第16页 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞 | 第16页 |
| 1.2.2 脂肪来源间充质干细胞 | 第16页 |
| 1.2.3 胎盘来源的间充质干细胞 | 第16页 |
| 1.3 骨髓间充质干细胞中多能干细胞的研究 | 第16-22页 |
| 1.3.1 极小胚胎样干细胞的分离和生物特性 | 第17-20页 |
| 1.3.2 Multilineage-differentiating stress-enduring cell的分离和生物特性 | 第20-21页 |
| 1.3.3 Stem-Bios细胞的分离和生物特性 | 第21-22页 |
| 1.4 长时间胰酶消化法对间充质干细胞的影响 | 第22-23页 |
| 1.4.1 胰酶消化细胞的原理 | 第22页 |
| 1.4.2 胰蛋白酶消化处理在干细胞研究中的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 成体干细胞的体外培养方法 | 第23-25页 |
| 1.5.1 贴壁培养法 | 第23-24页 |
| 1.5.2 悬浮培养法 | 第24页 |
| 1.5.3 饲养层培养法 | 第24页 |
| 1.5.4 三维培养体系 | 第24-25页 |
| 第二章 牛骨髓间充质干细胞的分离与鉴定 | 第25-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2 实验所用溶液配方 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.3.1 全骨髓贴壁法分离分离牛胎儿骨髓间充质干细胞 | 第26-27页 |
| 2.3.2 骨髓间充质干细胞的冻存 | 第27页 |
| 2.3.3 骨髓间充质干细胞生长曲线的绘制 | 第27页 |
| 2.3.4 碱性磷酸酶染色 | 第27页 |
| 2.3.5 流式细胞仪检测间充质干细胞的表面标记 | 第27页 |
| 2.3.6 骨髓间充质干细胞的细胞周期检测 | 第27页 |
| 2.3.7 骨髓间充质干细胞多能蛋白的免疫荧光染色 | 第27-28页 |
| 2.3.8 骨髓间充质干细胞体外诱导分化实验 | 第28页 |
| 2.4 实验结果 | 第28-33页 |
| 2.4.1 骨髓间充质干细胞贴壁培养时的形态 | 第28-29页 |
| 2.4.2 骨髓间充质干细胞生长曲线 | 第29页 |
| 2.4.3 骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性染色 | 第29-30页 |
| 2.4.4 流式检测骨髓间充质干细胞表面标记 | 第30页 |
| 2.4.5 流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞细胞周期 | 第30-31页 |
| 2.4.6 骨髓间充质干细胞中多能蛋白的免疫荧光染色 | 第31-32页 |
| 2.4.7 骨髓间充质干细胞向成骨、脂肪和软骨细胞分化 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 LTT法处理对骨髓间充质干细胞的影响 | 第35-59页 |
| 3.1 材料和方法 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第36页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2 实验所用溶液配方 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-45页 |
| 3.3.1 牛骨髓间充质干细胞的解冻与传代培养 | 第38页 |
| 3.3.2 牛骨髓间充质干细胞的消化处理 | 第38-39页 |
| 3.3.3 台盼蓝染色法计算经消化处理后的细胞活率 | 第39页 |
| 3.3.4 RNA的提取和模板cDNA的获得 | 第39-40页 |
| 3.3.5 Q-RT PCR检测LTT法处理后BMSC的多能基因相对表达量 | 第40-42页 |
| 3.3.6 消化处理前后端粒相对长度的变化 | 第42页 |
| 3.3.7 LTT-BMSC细胞周期的检测 | 第42-43页 |
| 3.3.8 Brdu染色检测增殖 | 第43页 |
| 3.3.9 碱性磷酸酶染色 | 第43页 |
| 3.3.10 LTT-BMSC的免疫荧光染色 | 第43页 |
| 3.3.11 BMSC和LTT-BMSC的核型分析 | 第43-44页 |
| 3.3.12 3D法培养BMSC和LTT-BMSC | 第44页 |
| 3.3.13 3D培养LTT-BMSC的免疫荧光染色 | 第44页 |
| 3.3.14 LTT-BMSC的碱性成纤维生长因子处理 | 第44页 |
| 3.3.15 bFGF处理后细胞的生长曲线 | 第44页 |
| 3.3.16 不同浓度bFGF处理后的免疫荧光染色 | 第44-45页 |
| 3.3.17 不同浓度bFGF处理后细胞OCT4表达的流式检测 | 第45页 |
| 3.3.18 实时荧光定量PCR检测bFGF处理后LTT-BMSC中多能性基因相对表达量的变化 | 第45页 |
| 3.3.19 蛋白质印迹法测不同浓度bFGF条件下细胞的多能蛋白表达 | 第45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-56页 |
| 3.4.1 骨髓间充质干细胞消化处理后的生长形态 | 第45-46页 |
| 3.4.2 胰酶消化处理后台盼蓝染色结果 | 第46-47页 |
| 3.4.3 LTT法处理后BMSC的多能基因相对表达量的Q-RT PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.4.4 BM-MSC与LTT-BMSC细胞中端粒相对长度 | 第48页 |
| 3.4.5 LTT-BMSC细胞周期检测 | 第48-49页 |
| 3.4.6 BM-MSC与LTT-BMSC细胞的Brdu染色 | 第49页 |
| 3.4.7 BM-MSC与LTT-BMSC细胞的AP染色 | 第49页 |
| 3.4.8 LTT-BMSC细胞的免疫荧光染色 | 第49-50页 |
| 3.4.9 BM-MSC与LTT-BMSC细胞的核型分析 | 第50-51页 |
| 3.4.10 3D培养BMSC和LTT-BMSC的形态 | 第51页 |
| 3.4.11 3D培养LTT-BMSC的免疫荧光染色 | 第51-52页 |
| 3.4.12 bFGF处理后的LTT-BMSC的形态观察 | 第52-53页 |
| 3.4.13 不同浓度bFGF处理后的LTT-BMSC的生长曲线绘制 | 第53页 |
| 3.4.14 bFGF处理LTT-BMSC后的免疫荧光染色结果 | 第53-54页 |
| 3.4.15不同浓度bFGF处理后的LTT-BMSC的OCT4流式检测结果 | 第54-55页 |
| 3.4.16 bFGF处理后LTT-BMSC细胞中多能基因的相对表达量 | 第55页 |
| 3.4.17 Western-Blot结果 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-58页 |
| 3.6 小结 | 第58-59页 |
| 全文结论 | 第59页 |
| 创新点 | 第59页 |
| 进一步研究课题 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
