| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第11-26页 |
| 1.1 糖尿病简介 | 第11页 |
| 1.2 糖尿病药物简介 | 第11-14页 |
| 1.3 GLP-1 概述 | 第14-15页 |
| 1.4 利拉鲁肽概述 | 第15-18页 |
| 1.5 多肽药物长效化策略 | 第18-21页 |
| 1.5.1 化学修饰法 | 第18-20页 |
| 1.5.1.1 PEG修饰法 | 第19页 |
| 1.5.1.2 多肽骨架修饰及氨基酸替换法 | 第19页 |
| 1.5.1.3 其它化学修饰法 | 第19-20页 |
| 1.5.2 微球包埋法 | 第20页 |
| 1.5.3 蛋白质融合技术 | 第20-21页 |
| 1.5.4 纳米技术 | 第21页 |
| 1.6 聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）载体简介 | 第21-23页 |
| 1.7 本课题的研究意义 | 第23-26页 |
| 第2章 GLP-1 类似物的制备 | 第26-74页 |
| 2.1 GLP-1 类似物的表达 | 第26-41页 |
| 2.1.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1.1 菌种 | 第26页 |
| 2.1.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.1.3 试剂 | 第27页 |
| 2.1.1.4 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.1.2.1 超低温感受态的制备 | 第28-29页 |
| 2.1.2.2 p MFH-GLP-1~(R34)转化 | 第29页 |
| 2.1.2.3 p MFH-GLP-1~(R34)质粒提取 | 第29页 |
| 2.1.2.4 p MFH-GLP-1~(R34)的小批量表达 | 第29-30页 |
| 2.1.2.5 p MFH-GLP-1~(R34)表达的优化 | 第30-31页 |
| 2.1.2.6 p MFH-GLP-1~(R34)在发酵罐中表达 | 第31-32页 |
| 2.1.3 结果 | 第32-39页 |
| 2.1.3.1 超低温感受态的效率 | 第32页 |
| 2.1.3.2 p MFH-GLP-1~(R34)质粒浓度 | 第32页 |
| 2.1.3.3 p MFH-GLP-1~(R34)的小批量表达 | 第32-33页 |
| 2.1.3.4 p MFH-GLP-1~(R34)表达的优化 | 第33-36页 |
| 2.1.3.5 p MFH-GLP-1~(R34)大规模表达 | 第36-39页 |
| 2.1.4 讨论 | 第39-41页 |
| 2.1.4.1 重组表达载体的选择 | 第39页 |
| 2.1.4.2 重组融合蛋白表达 | 第39-41页 |
| 2.1.5 小结 | 第41页 |
| 2.2 GLP-1 类似物的纯化 | 第41-74页 |
| 2.2.1 材料 | 第41-44页 |
| 2.2.1.1 主要实验材料及试剂 | 第41-42页 |
| 2.2.1.2 主要仪器设备及器材 | 第42-43页 |
| 2.2.1.3 常用试剂配制 | 第43-44页 |
| 2.2.2 方法 | 第44-55页 |
| 2.2.2.1 重组蛋白检测方法 | 第44-46页 |
| 2.2.2.2 融合蛋白的分离纯化 | 第46页 |
| 2.2.2.3 MFH融合蛋白甲酸水解 | 第46-47页 |
| 2.2.2.4 His-GLP-1~(R34)的分离纯化 | 第47-52页 |
| 2.2.2.5 His-GLP-1~(R34)的体外活性检测 | 第52-53页 |
| 2.2.2.6 组氨酸的切除及目的多肽的纯化 | 第53-55页 |
| 2.2.3 结果 | 第55-70页 |
| 2.2.3.1 MFH融合蛋白的分离和纯化 | 第55-57页 |
| 2.2.3.2 MFH融合蛋白甲酸水解 | 第57页 |
| 2.2.3.3 His-GLP-1~(R34)的纯化 | 第57-65页 |
| 2.2.3.4 His-GLP-1~(R34)的体外活性检测 | 第65-67页 |
| 2.2.3.5 组氨酸标签的切除 | 第67-70页 |
| 2.2.4 讨论 | 第70-72页 |
| 2.2.4.1 融合蛋白的分离纯化 | 第70-71页 |
| 2.2.4.2 融合蛋白甲酸水解 | 第71页 |
| 2.2.4.3 GLP-1~(R34)的纯化 | 第71-72页 |
| 2.2.5 小结 | 第72-74页 |
| 第3章 GLP-1 类似物纳米粒的制备 | 第74-84页 |
| 3.1 PLGA空白纳米粒的制备 | 第74-77页 |
| 3.1.1 材料 | 第74页 |
| 3.1.1.1 主要实验材料及试剂 | 第74页 |
| 3.1.1.2 主要仪器设备 | 第74页 |
| 3.1.2 方法 | 第74-75页 |
| 3.1.3 结果 | 第75-76页 |
| 3.1.4 讨论 | 第76-77页 |
| 3.1.5 小结 | 第77页 |
| 3.2 PLGA-GLP-1 类似物纳米粒的制备 | 第77-78页 |
| 3.2.1 材料 | 第77页 |
| 3.2.1.1 主要实验材料及试剂 | 第77页 |
| 3.2.1.2 主要仪器设备 | 第77页 |
| 3.2.2 方法 | 第77页 |
| 3.2.3 结果 | 第77-78页 |
| 3.2.4 讨论 | 第78页 |
| 3.2.5 小结 | 第78页 |
| 3.3 纳米粒的表征 | 第78-84页 |
| 3.3.1 材料 | 第78页 |
| 3.3.1.1 主要实验材料及试剂 | 第78页 |
| 3.3.1.2 主要仪器设备 | 第78页 |
| 3.3.2 方法 | 第78-79页 |
| 3.3.2.1 动态激光散射法测量纳米粒粒径 | 第79页 |
| 3.3.2.2 动态激光散射法测量Zeta电位 | 第79页 |
| 3.3.2.3 空白纳米粒体外降解 | 第79页 |
| 3.3.3 结果 | 第79-83页 |
| 3.3.3.1 溶剂和PVA浓度对纳米粒制备的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.3.2 不同稀释比例对粒径测量的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.3.3 PLGA体外降解 | 第82-83页 |
| 3.3.4 讨论 | 第83页 |
| 3.3.5 小结 | 第83-84页 |
| 第4章 总结与展望 | 第84-86页 |
| 4.1 全文总结 | 第84页 |
| 4.2 创新点 | 第84-85页 |
| 4.3 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 硕士期间发表的专利 | 第94页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第94页 |
| 硕士期间发表的会议论文 | 第94-95页 |
| 附录——缩略词表 | 第95-97页 |
