| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 引言 | 第9-20页 |
| 1.1 p53、MdmX与Mdm2之间的关系 | 第9-15页 |
| 1.1.1 p53蛋白的结构与功能 | 第9页 |
| 1.1.2 Mdm2/MdmX蛋白的结构与功能 | 第9-11页 |
| 1.1.3 p53-MdmX/Mdm2与肿瘤发生的关系 | 第11-12页 |
| 1.1.4 p53-MdmX/Mdm2抑制剂研究现状及设计的策略 | 第12-15页 |
| 1.2 课题设计和研究内容 | 第15-20页 |
| 1.2.1 课题设计基础 | 第15-17页 |
| 1.2.2 研究方案与内容 | 第17-20页 |
| 第2章 N-Mdm2和Nutlin-3a蛋白质晶体结构解析 | 第20-40页 |
| 2.1 研究背景 | 第20-21页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第21-24页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 N-Mdm2蛋白表达与纯化 | 第24-28页 |
| 2.3.1.1 N-Mdm2蛋白表达 | 第24-25页 |
| 2.3.1.2 N-Mdm2蛋白纯化 | 第25-28页 |
| 2.3.2 N-Mdm2与nutlin-3a复合物晶体培养 | 第28-29页 |
| 2.3.2.1 带His标签N-Mdm2与nutlin-3a复合物晶体培养 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 无His标签N-Mdm2与nutlin-3a复合物晶体培养 | 第29页 |
| 2.3.3 N-Mdm2与nutlin-3a复合物晶体衍射 | 第29-30页 |
| 2.4 试验结果 | 第30-38页 |
| 2.4.1 N-Mdm2蛋白的纯化 | 第30-36页 |
| 2.4.1.1 带His标签的N-Mdm2蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.1.2 切除标签的N-Mdm2蛋白的纯化 | 第31-36页 |
| 2.4.2 N-Mdm2蛋白与nutlin-3a复合物的晶体衍射 | 第36-38页 |
| 2.4.2.1 带His标签的N-Mdm2蛋白与nutlin-3a复合物晶体衍射 | 第36-37页 |
| 2.4.2.2 切除标签的N-Mdm2蛋白与nutlin-3a复合物晶体衍射 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 小结 | 第39-40页 |
| 第3章 建立新型的MdmX/Mdm2抑制剂筛选模型 | 第40-73页 |
| 3.1 研究背景 | 第40页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.3 p53p-XX-N-MdmX融合蛋白筛选模型的构建 | 第41-56页 |
| 3.3.1 试验方法 | 第41-48页 |
| 3.3.1.1 p53p-XX-N-MdmX融合蛋白表达质粒构建 | 第41-44页 |
| 3.3.1.2 p53p-XX-N-MdmX融合蛋白蛋白表达与纯化 | 第44-45页 |
| 3.3.1.3 nutlin-3a验证融合蛋白抑制剂筛选模型 | 第45-47页 |
| 3.3.1.4 小分子化合物库验证融合蛋白筛选模型 | 第47-48页 |
| 3.3.2 试验结果 | 第48-56页 |
| 3.3.2.1 p53p-XX-N-MdmX融合蛋白表达纯化 | 第48-50页 |
| 3.3.2.2 p53p-XX-N-MdmX融合蛋白筛选MdmX抑制剂可行性分析 | 第50-56页 |
| 3.4 p53p~(F19A)-XX-N-MdmX与p53p~(L26A)-XX-N-MdmX融合蛋白筛选模型的构建 | 第56-69页 |
| 3.4.1 试验方法 | 第56-61页 |
| 3.4.1.1 p53p~(F19A)-XX-N-Mdm X与p53p~(L26A)-XX-N-MdmX融合蛋白质粒构建 | 第56-58页 |
| 3.4.1.2 融合蛋白蛋白表达与纯化 | 第58-59页 |
| 3.4.1.3 盐酸胍验证三种融合蛋白稳定性 | 第59-60页 |
| 3.4.1.4 三种融合蛋白筛选模型筛选小分子化合物库 | 第60-61页 |
| 3.4.2 试验结果 | 第61-69页 |
| 3.4.2.1 两个突变体质粒构建 | 第61-62页 |
| 3.4.2.2 两个突变体融合蛋白的纯化 | 第62-65页 |
| 3.4.2.3 盐酸胍验证三种融合蛋白的稳定性 | 第65-67页 |
| 3.4.2.4 三种融合蛋白筛选小分子化合物库 | 第67-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-70页 |
| 3.6 创新点 | 第70-72页 |
| 3.7 小结 | 第72-73页 |
| 第4章 苯并二氮卓化合物结合机制研究 | 第73-91页 |
| 4.1 研究背景 | 第73-75页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第75-76页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第75-76页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第76页 |
| 4.3 试验方法 | 第76-83页 |
| 4.3.1 ~(15)N单标记p53p~(F19A)-XX-N-MdmX融合蛋白的表达与纯化 | 第76-78页 |
| 4.3.2 四个小分子化合物N-H相关HSQC滴定p53p~(F19A)-XX-N-MdmX融合蛋白 | 第78-80页 |
| 4.3.3 片段化合物滴定p53p~(F19A)-XX-N-MdmX融合蛋白 | 第80-82页 |
| 4.3.4 小分子片段化合物的荧光验证 | 第82-83页 |
| 4.4 试验结果 | 第83-89页 |
| 4.4.1 四个小分子化合物核磁滴定p53p~(F19A)-XX-N-MdmX融合蛋白 | 第83-85页 |
| 4.4.2 片段化合物核磁滴定p53p~(F19A)-XX-N-MdmX融合蛋白 | 第85-88页 |
| 4.4.3 片段化合物荧光验证 | 第88-89页 |
| 4.5 讨论 | 第89-90页 |
| 4.6 小结 | 第90-91页 |
| 第5章 论文总结与展望 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 附录 | 第99-105页 |
