| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 引言 | 第10-12页 |
| 1.1.1 马铃薯X病毒 | 第10-11页 |
| 1.1.2 马铃薯Y病毒 | 第11页 |
| 1.1.3 马铃薯纺锤块茎类病毒 | 第11-12页 |
| 1.1.4 马铃薯病毒、类病毒的检测 | 第12页 |
| 1.1.5 马铃薯病毒、类病毒病的防治 | 第12页 |
| 1.2 基因沉默及其作用机制 | 第12-14页 |
| 1.2.1 沉默抑制子P25、Hc-pro的功能 | 第13页 |
| 1.2.2 Virp1蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 RNA沉默在植物抗病毒中的应用 | 第14页 |
| 1.3 miRNA的合成及其作用机制 | 第14-15页 |
| 1.4 miRNA的功能 | 第15页 |
| 1.5 人工miRNA策略在植物抗病毒方面的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第16页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 1.8 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 供试植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 供试毒源和工程菌 | 第18页 |
| 2.1.3 供试载体、酶及主要试剂 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-34页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第18-20页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.3 P25、Hc-pro基因序列剪切热点分析 | 第21-24页 |
| 2.2.4 靶向P25、Hc-pro剪切热点的amiRNA前体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.5 双元表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.6 农杆菌介导法转化马铃薯 | 第28-30页 |
| 2.2.7 转基因植株的PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.2.8 荧光定量 PCR 检测植株内 amiRNA 的表达量 | 第30-31页 |
| 2.2.9 转基因植株的抗病性鉴定 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 P25及Hc-pro基因序列剪切热点分析 | 第34页 |
| 3.2 靶向P25、Hc-pro剪切热点的amiRNA前体的构建 | 第34-37页 |
| 3.2.1 pre-miR159a的扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.2 pre-miR159a的改造 | 第35-37页 |
| 3.3 表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.4 amiRNA表达载体转化农杆菌及其鉴定 | 第38页 |
| 3.5 农杆菌介导法转化马铃薯及PCR检测 | 第38-41页 |
| 3.6 转基因植株对PVX的抗病表现 | 第41-42页 |
| 3.7 荧光定量PCR检测转基因阳性植株中的 1300221-amiR-P25-1/2 表达量 | 第42-44页 |
| 3.8 转基因植株对PVY的抗病表现 | 第44-45页 |
| 3.9 荧光定量PCR检测转基因阳性植株中的amiR-Hc-pro表达量 | 第45-46页 |
| 3.10 转基因植株对PSTVd的抗病表现 | 第46-47页 |
| 3.11 荧光定量PCR检测转基因阳性植株中的amiR-virp1-301表达量 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 人工microRNA表达载体的构建 | 第50页 |
| 4.2 人工microRNA在植株体内的表达 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-54页 |
| 5.1 人工microRNA表达载体的构建 | 第52页 |
| 5.2 人工microRNA表达量的检测 | 第52页 |
| 5.3 再生植株的抗性鉴定 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 个人简历 | 第64页 |
