| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 甘露醇的性质与应用 | 第9-12页 |
| 1.1.1 甘露醇简介 | 第9页 |
| 1.1.2 甘露醇结构及性质 | 第9-10页 |
| 1.1.3 甘露醇的应用 | 第10-12页 |
| 1.2 甘露醇的生产及市场概况 | 第12-14页 |
| 1.2.1 甘露醇生产技术 | 第12-14页 |
| 1.2.2 甘露醇市场概况 | 第14页 |
| 1.3 利用全细胞催化制备甘露醇 | 第14-15页 |
| 1.3.1 全细胞催化生产甘露醇的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.4 制备甘露醇原料 | 第15-18页 |
| 1.4.1 原料 | 第15-16页 |
| 1.4.2 果糖基能源植物——菊芋概述 | 第16-18页 |
| 1.4.2.1 菊粉的生产 | 第17页 |
| 1.4.2.2 菊芋的开发与应用 | 第17-18页 |
| 1.5 课题研究意义和研究内容 | 第18-21页 |
| 1.5.1 课题的研究意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 课题主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 基因的克隆与表达 | 第21-37页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 菌株来源 | 第21页 |
| 2.2.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.3.1 药品 | 第22页 |
| 2.2.3.2 分子克隆相关试剂及试剂盒 | 第22页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 原核表达载体pRSFDuet-mdh-fdh的构建 | 第23-30页 |
| 2.3.1 甘露醇脱氢酶密码子的优化 | 第23页 |
| 2.3.2 甲酸脱氢酶基因的克隆 | 第23-26页 |
| 2.3.2.1 目的基因的提取及检测 | 第23-24页 |
| 2.3.2.2 PCR扩增目的基因及验证 | 第24-26页 |
| 2.3.3 甘露醇脱氢酶及甲酸脱氢酶共表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.3.1 双酶切目的基因及质粒 | 第26页 |
| 2.3.3.2 DNA片段的连接转化及验证 | 第26-27页 |
| 2.3.4 重组质粒在大肠杆菌内的表达 | 第27-29页 |
| 2.3.4.1 SDS-PAGE检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4.2 甘露醇脱氢酶及甲酸脱氢酶酶活力测定 | 第29页 |
| 2.3.5 重组菌株诱导表达条件的摸索 | 第29-30页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.4.1 甘露醇脱氢酶密码子优化 | 第30-31页 |
| 2.4.2 甲酸脱氢酶序列的克隆 | 第31-32页 |
| 2.4.3 表达载体建pRSFDuet-mdh-fdh的构建 | 第32页 |
| 2.4.4 目的蛋白的表达及酶活分析 | 第32-33页 |
| 2.4.5 重组菌株诱导条件的摸索 | 第33-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 全细胞催化生产甘露醇 | 第37-41页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 试剂及菌种 | 第37页 |
| 3.2.2 仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.3.1 原核表达载体B121/pRSFDuet-mdh-fdh pZY507glf的构建 | 第38页 |
| 3.3.2 HPLC实验 | 第38-39页 |
| 3.3.2.1 全细胞催化方法 | 第38页 |
| 3.3.2.2 HPLC分析 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.4.1 不同pH条件对甘露醇产量的影响 | 第39页 |
| 3.4.2 不同温度对甘露醇产量的影响 | 第39-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 以菊粉为底物全细胞催化生产甘露醇 | 第41-49页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第41-42页 |
| 4.2.1 试剂及菌种 | 第41-42页 |
| 4.2.2 仪器设备 | 第42页 |
| 4.3 方法 | 第42-44页 |
| 4.3.1 原核表达载体pET22b-Inu的构建和表达 | 第42页 |
| 4.3.2 菊粉酶酶活力测定 | 第42-44页 |
| 4.4 原核表达载体B121/pRSFDuet-mdh-fdh pZY507-glfpET22b-Inu生产甘露醇 | 第44-46页 |
| 4.4.1 质粒pET22b-Inu的表达及表达产物的分析 | 第44-45页 |
| 4.4.2 表达载体B121/pRSFDuet-mdh-fdh pZY507-glfpET 22b-Inu的构建 | 第45-46页 |
| 4.5 以菊粉为底物外源添加菊粉酶生产甘露醇 | 第46-47页 |
| 4.6 本章小结 | 第47-49页 |
| 第五章 结论与展望 | 第49-51页 |
| 5.1 本文主要结论 | 第49页 |
| 5.2 展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
