| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 迟缓爱德华菌研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 致病机理和毒力基因 | 第13-14页 |
| 1.1.3 迟缓爱德华菌病的防控 | 第14页 |
| 1.2 罗非鱼养殖概况 | 第14-15页 |
| 1.3 鱼类免疫系统 | 第15-17页 |
| 1.3.1 鱼类的免疫器官 | 第15-16页 |
| 1.3.2 鱼类的免疫细胞 | 第16页 |
| 1.3.3 鱼类的体液免疫因子 | 第16-17页 |
| 1.3.4 鱼类的细胞因子 | 第17页 |
| 1.4 影响鱼类免疫的主要因素 | 第17-18页 |
| 1.4.1 固有免疫应答及其调节 | 第17页 |
| 1.4.2 适应性免疫应答及其调节 | 第17-18页 |
| 1.4.3 母源性免疫(maternal immunity) | 第18页 |
| 1.5 鱼类疫苗的接种途径 | 第18页 |
| 1.6 疫苗研究现状 | 第18-19页 |
| 1.6.1 疫苗种类 | 第18-19页 |
| 1.6.2 弱毒疫苗的优点 | 第19页 |
| 1.7 荧光定量技术 | 第19-20页 |
| 1.7.1 荧光定量技术的分类 | 第19-20页 |
| 1.7.2 实时荧光定量PCR的定量方法 | 第20页 |
| 1.8 研究背景 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验用鱼及菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 实验所用溶液及其配制 | 第21-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 迟缓爱德华菌的分离鉴定 | 第23-28页 |
| 2.2.1.1 细菌的分离与纯化 | 第23页 |
| 2.2.1.2 分离菌株的鉴定 | 第23-27页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增迟缓爱德华的常见毒力基因 | 第27-28页 |
| 2.2.2 疫苗制备 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 迟缓爱德华菌弱毒疫苗和灭活疫苗的制备 | 第28页 |
| 2.2.2.2 疫苗的无菌检验 | 第28-29页 |
| 2.2.3 疫苗对罗非鱼的免疫实验 | 第29-35页 |
| 2.2.3.1 动物分组免疫与采血 | 第29页 |
| 2.2.3.2 ELISA检测抗体效价 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 荧光定量PCR检测罗非鱼细胞因子的相对表达量 | 第30-33页 |
| 2.2.3.4 酶活力检测 | 第33-34页 |
| 2.2.3.5 相对免疫保护率的测定 | 第34页 |
| 2.2.3.6 数据处理分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-57页 |
| 3.1 分离菌株的鉴定及分析 | 第35-42页 |
| 3.1.1 分离菌株的形态 | 第35页 |
| 3.1.2 生化鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.1.3 分离菌株的16SrDNA基因序列分析 | 第36-37页 |
| 3.1.4 特异性引物检测结果 | 第37页 |
| 3.1.5 分离菌株TANX药敏实验结果 | 第37-38页 |
| 3.1.6 PCR扩增迟缓爱德华菌主要毒力基因 | 第38-42页 |
| 3.2 疫苗安全性实验 | 第42页 |
| 3.3 攻毒剂量的确定 | 第42页 |
| 3.4 ELISA最佳抗体浓度 | 第42-43页 |
| 3.5 抗体水平测定 | 第43-44页 |
| 3.6 酶活力测定结果 | 第44-47页 |
| 3.6.1 血清中超氧化物歧化酶含量 | 第44-45页 |
| 3.6.2 免疫对血清中酸性磷酸酶含量的影响 | 第45-46页 |
| 3.6.3 免疫对血清中碱性磷酸酶含量的影响 | 第46-47页 |
| 3.7 荧光定量测定结果 | 第47-56页 |
| 3.7.1 免疫对TNF在头肾和脾脏中相对表达量的影响 | 第50-51页 |
| 3.7.2 免疫对IL-1 在头肾和脾脏中相对表达量的影响 | 第51-52页 |
| 3.7.3 免疫对IFN在头肾和脾脏中相对表达量的影响 | 第52-54页 |
| 3.7.4 免疫对Caspase3在头肾和脾脏中相对表达量的影响 | 第54-56页 |
| 3.8 相对免疫保护率结果 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 罗非鱼抗体水平 | 第57页 |
| 4.2 罗非鱼血清中酶活力 | 第57-58页 |
| 4.3 疫苗免疫对罗非鱼免疫相关基因的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 疫苗免疫对罗非鱼的免疫保护率 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 研究生期间发表论文 | 第67页 |
