| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1. 引言 | 第15-28页 |
| 1.1 空肠弯曲菌研究现状 | 第15-21页 |
| 1.1.1 病原学 | 第15-16页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第16-18页 |
| 1.1.3 毒力因子 | 第18-19页 |
| 1.1.4 检测空肠弯曲菌的方法 | 第19-21页 |
| 1.2 乳酸菌及其表达系统的研究现状 | 第21-25页 |
| 1.2.1 乳酸菌的概述 | 第21-22页 |
| 1.2.2 乳酸菌表达系统 | 第22-23页 |
| 1.2.3 食品级表达系统 | 第23-25页 |
| 1.2.4 乳酸菌作为活疫苗抗原传递载体 | 第25页 |
| 1.3 黏膜免疫的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.1 黏膜免疫疫苗的研究 | 第25-26页 |
| 1.3.2 大肠杆菌不耐热毒素(LT)作为黏膜免疫佐剂的研究 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-53页 |
| 2.1 材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 菌种 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基的制备 | 第28-31页 |
| 2.2 胞内表达空肠弯曲菌cfrA基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第31-39页 |
| 2.2.1 空肠弯曲菌cfrA基因重组乳酸乳球菌表达载体的构建技术路线图(见图 2-1) | 第31-32页 |
| 2.2.2 乳酸乳球菌表达质粒pNZ8149质粒图谱 | 第32页 |
| 2.2.3 cfrA基因的PCR扩增 | 第32-34页 |
| 2.2.4 cfrA基因的克隆与鉴定 | 第34-37页 |
| 2.2.5 表达cfrA基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第37-39页 |
| 2.3 cfrA基因在重组乳酸乳球菌中的表达及表达条件的优化 | 第39-41页 |
| 2.3.1 重组乳酸乳球菌cfrA基因的诱导表达 | 第39页 |
| 2.3.2 表达产物的Western blot检测分析 | 第39-40页 |
| 2.3.3 重组乳酸乳球菌表达条件的优化 | 第40-41页 |
| 2.4 表达CfrA蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫研究 | 第41-42页 |
| 2.4.1 口服免疫 | 第41页 |
| 2.4.2 乳酸乳球菌自鸡体内排出的测定 | 第41页 |
| 2.4.3 血清IgG和肠粘膜sIgA的测定 | 第41-42页 |
| 2.4.4 攻毒保护试验 | 第42页 |
| 2.5 表达空肠弯曲菌cjaA基因大肠杆菌重组表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.5.1 cjaA基因的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 2.5.2 cjaA基因的克隆与鉴定 | 第43-44页 |
| 2.5.3 表达cjaA基因重组大肠杆菌的构建 | 第44-45页 |
| 2.6 cjaA基因在重组大肠杆菌中的表达与纯化 | 第45-46页 |
| 2.6.1 重组蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| 2.6.2 重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.7 分泌表达空肠弯曲菌cjaA与cjaA-ltb基因的重组乳酸乳球菌的构建 | 第46-50页 |
| 2.7.1 表达cjaA与cjaA-ltb基因重组分泌性乳酸乳球菌的构建示意图 | 第46-47页 |
| 2.7.2 cjaA、SPusp45和ltb基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 2.7.3 cjaA、SPusp45和ltb基因的克隆与鉴定 | 第48页 |
| 2.7.4 分泌性重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.7.5 表达cjaA基因重组分泌性乳酸菌表达系统的构建 | 第49-50页 |
| 2.7.6 融合表达cjaA与ltb重组分泌性乳酸菌表达系统的构建 | 第50页 |
| 2.8 cjaA与cjaA-ltb基因在重组分泌性乳酸乳球菌中的表达 | 第50-51页 |
| 2.8.1 重组乳酸乳球菌的诱导表达 | 第50页 |
| 2.8.2 表达产物的Western blot检测分析 | 第50-51页 |
| 2.9 表达CjaA蛋白和融合表达CjaA与LTB重组分泌性乳酸乳球菌口服免疫研究 | 第51-53页 |
| 2.9.1 口服免疫 | 第51页 |
| 2.9.2 乳酸乳球菌自鸡体内排出的测定 | 第51-52页 |
| 2.9.3 血清IgG和肠粘膜sIgA的测定 | 第52页 |
| 2.9.4 攻毒保护试验 | 第52-53页 |
| 3. 结果与分析 | 第53-68页 |
| 3.1 胞内表达空肠弯曲菌cfrA基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第53-55页 |
| 3.1.1 cfrA基因的PCR扩增 | 第53页 |
| 3.1.2 cfrA基因的克隆与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.1.3 表达cfrA基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第54-55页 |
| 3.2 cfrA基因在重组乳酸乳球菌中的表达及表达条件的优化 | 第55-58页 |
| 3.2.1 表达产物的Western blot检测分析 | 第55-56页 |
| 3.2.2 重组乳酸乳球菌表达条件的优化 | 第56-58页 |
| 3.3 表达CfrA蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫研究 | 第58-60页 |
| 3.3.1 重组乳酸乳球菌自鸡体内排出的测定结果 | 第58页 |
| 3.3.2 血清IgG和肠粘膜sIgA抗体水平的测定结果 | 第58-59页 |
| 3.3.3 空肠弯曲菌在鸡肠道内定殖的测定结果 | 第59-60页 |
| 3.4 表达空肠弯曲菌cjaA基因大肠杆菌重组表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.4.1 cjaA基因的PCR扩增 | 第60页 |
| 3.4.2 cjaA基因的克隆与鉴定 | 第60页 |
| 3.4.3 大肠杆菌重组表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.5 cjaA基因在重组大肠杆菌中的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 3.6 分泌表达空肠弯曲菌cjaA与cjaA-ltb基因重组乳酸乳球菌的构建 | 第62-63页 |
| 3.6.1 SPusp45、cjaA和ltb基因的PCR扩增 | 第62页 |
| 3.6.2 SPusp45、cjaA和ltb基因的克隆与鉴定 | 第62-63页 |
| 3.6.3 分泌性重组表达载体的构建 | 第63页 |
| 3.7 cjaA与cjaA-ltb基因在重组分泌性乳酸乳球菌中的表达 | 第63-66页 |
| 3.7.1 表达产物的SDS-PAGE检测分析 | 第63-64页 |
| 3.7.2 表达产物的Western blot检测分析 | 第64-65页 |
| 3.7.3 分泌表达的Western blot检测分析 | 第65-66页 |
| 3.8 表达CjaA蛋白的重组分泌性乳酸乳球菌口服免疫研究 | 第66-68页 |
| 3.8.1 重组乳酸乳球菌自鸡体内排出的测定结果 | 第66页 |
| 3.8.2 口服免疫后鸡体重的变化 | 第66-67页 |
| 3.8.3 血清IgG和肠粘膜sIgA抗体水平的测定结果 | 第67-68页 |
| 3.8.4 空肠弯曲菌在鸡肠道内定殖的测定结果 | 第68页 |
| 4. 讨论 | 第68-72页 |
| 5. 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 个人简介 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第80页 |
