| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 昆虫免疫的简介 | 第13-17页 |
| 1.1.1 信号途径 | 第13-14页 |
| 1.1.2 抗菌肽和溶菌酶 | 第14-15页 |
| 1.1.3 细胞免疫 | 第15-17页 |
| 1.2 活性氧 | 第17-19页 |
| 1.2.1 活性氧与氧化还原稳态 | 第17-18页 |
| 1.2.2 活性氧与昆虫的免疫 | 第18-19页 |
| 1.3 豌豆蚜免疫的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 蚜虫共生菌简介 | 第21-22页 |
| 1.4.1 专性共生菌 | 第22页 |
| 1.4.2 兼性共生菌 | 第22页 |
| 1.5 蚜虫兼性共生菌介导的抗性 | 第22-24页 |
| 1.5.1 对寄生蜂的抗性 | 第23-24页 |
| 1.5.2 对真菌的抗性 | 第24页 |
| 1.6 本研究的目的、意义及内容 | 第24-25页 |
| 第二章 细菌感染豌豆蚜后活性氧浓度及相关基因表达量测定 | 第25-34页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 昆虫 | 第25-26页 |
| 2.2.2 细菌感染 | 第26页 |
| 2.2.3 豌豆蚜存活率试验 | 第26页 |
| 2.2.4 CFU测定 | 第26页 |
| 2.2.5 豌豆蚜后代计数 | 第26页 |
| 2.2.6 H_2O_2测定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 总RNA提取 | 第27页 |
| 2.2.8 RNA纯化 | 第27页 |
| 2.2.9 反转录cDNA | 第27-28页 |
| 2.2.10 半定量PCR | 第28-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-33页 |
| 2.3.1 豌豆蚜感染细菌后的存活率 | 第29页 |
| 2.3.2 豌豆蚜体内细菌的增殖 | 第29-30页 |
| 2.3.3 细菌感染后豌豆蚜的后代数目 | 第30-31页 |
| 2.3.4 细菌感染后豌豆蚜体内H_2O_2水平检测 | 第31-32页 |
| 2.3.5 细菌感染后豌豆蚜体内活性氧代谢相关基因检测 | 第32-33页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 豌豆蚜过氧化物氧化还原酶1基因克隆及在免疫中的功能分析 | 第34-48页 |
| 3.1 引言 | 第34-35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 昆虫 | 第35页 |
| 3.2.2 细菌感染 | 第35页 |
| 3.2.3 H_2O_2处理 | 第35页 |
| 3.2.4 总RNA提取 | 第35页 |
| 3.2.5 RNA纯化 | 第35页 |
| 3.2.6 反转录cDNA | 第35页 |
| 3.2.7 基因组DNA提取 | 第35页 |
| 3.2.8 生物信息学分析及进化树建立 | 第35-36页 |
| 3.2.9 实时定量PCR | 第36页 |
| 3.2.10 半定量PCR | 第36-37页 |
| 3.2.11 ApPrx1原核表达及纯化 | 第37页 |
| 3.2.12 Western blot检测 | 第37页 |
| 3.2.13 过氧化物酶活测定 | 第37-38页 |
| 3.2.14 ApPrx1保护DNA试验 | 第38页 |
| 3.2.15 H_2O_2测定 | 第38页 |
| 3.2.16 dsRNA合成 | 第38页 |
| 3.2.17 RNA干扰 | 第38页 |
| 3.2.18 豌豆蚜存活率试验 | 第38页 |
| 3.2.19 CFU测定 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.3.1 ApPrx1基因序列分析 | 第39-42页 |
| 3.3.2 重组Ap Prx1的表达与纯化 | 第42页 |
| 3.3.3 重组Ap Prx1的活性鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.4 ApPrx1在不同虫龄中的表达 | 第43-44页 |
| 3.3.5 外源的H_2O_2注射和细菌感染诱导ApPrx1上调表达 | 第44-45页 |
| 3.3.6 RNA干扰验证ApPrx1保护蚜虫因细菌感染引起的氧化胁迫 | 第45-47页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 豌豆蚜过氧化物氧化还原酶2的鉴定及其参与抵御细菌感染引起的氧化胁迫 | 第48-59页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 昆虫 | 第48页 |
| 4.2.2 细菌感染 | 第48页 |
| 4.2.3 总RNA提取 | 第48-49页 |
| 4.2.4 RNA纯化 | 第49页 |
| 4.2.5 反转录cDNA | 第49页 |
| 4.2.6 序列比对和生物信息学分析 | 第49页 |
| 4.2.7 实时定量PCR | 第49页 |
| 4.2.8 ApPrx2原核表达及纯化 | 第49-50页 |
| 4.2.9 过氧化物酶活性测定 | 第50页 |
| 4.2.10 抑菌圈实验 | 第50页 |
| 4.2.11 H_2O_2测定 | 第50页 |
| 4.2.12 dsRNA合成及RNA干扰 | 第50页 |
| 4.2.13 豌豆蚜存活率及CFU测定 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-57页 |
| 4.3.1 ApPrx2序列和进化分析 | 第50页 |
| 4.3.2 重组Ap Prx2蛋白表达和抗氧化活性鉴定 | 第50-54页 |
| 4.3.3 细菌感染诱导豌豆蚜H_2O_2水平升高和ApPrx2表达 | 第54-55页 |
| 4.3.4 干扰Ap Prx2引起豌豆蚜体内过氧化氢水平升高 | 第55-56页 |
| 4.3.5 豌豆蚜感染金黄色葡萄球菌，干扰ApPrx2抑制细菌生长但蚜虫死亡率上升 | 第56-57页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 豌豆蚜无兼性共生菌品系的建立及兼性共生菌对豌豆蚜受细菌和真菌感染的影响 | 第59-75页 |
| 5.1 引言 | 第59-60页 |
| 5.2 材料与方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 昆虫 | 第60页 |
| 5.2.2 豌豆蚜兼性共生菌鉴定 | 第60-61页 |
| 5.2.3 氨苄青霉素喂食 | 第61-63页 |
| 5.2.4 显微注射氨苄青霉素 | 第63页 |
| 5.2.5 建立豌豆蚜无兼性共生菌品系 | 第63页 |
| 5.2.6 H_2O_2测定 | 第63页 |
| 5.2.7 细菌和真菌品系 | 第63页 |
| 5.2.8 细菌感染试验 | 第63页 |
| 5.2.9 真菌感染试验 | 第63-64页 |
| 5.2.10 共生菌数目测定 | 第64页 |
| 5.2.11 统计分析 | 第64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-72页 |
| 5.3.1 豌豆蚜兼性共生菌鉴定 | 第64-65页 |
| 5.3.2 S. symbiotica去除 | 第65-67页 |
| 5.3.3 无兼性共生菌豌豆蚜品系建立 | 第67-68页 |
| 5.3.4 去除S. symbiotica不影响豌豆蚜体内H_2O_2水平和B. aphidicola数目 | 第68页 |
| 5.3.5 S. symbiotica不影响豌豆蚜对细菌和真菌感染的敏感性 | 第68-70页 |
| 5.3.6 细菌感染引起豌豆蚜体内共生菌量的上升 | 第70-72页 |
| 5.3.7 球孢白僵菌感染对豌豆蚜体内共生菌数目无影响 | 第72页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第72-75页 |
| 第六章 全文总结 | 第75-77页 |
| 6.1 主要结论 | 第75页 |
| 6.2 创新点 | 第75页 |
| 6.3 研究展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-92页 |
| 附录 | 第92-93页 |
| 缩略词 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 作者简介 | 第96页 |
