| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 淀粉酶的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 淀粉 | 第14页 |
| 1.2 淀粉酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.3 α-淀粉酶 | 第15-22页 |
| 2 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第22-30页 |
| 2.1 毕赤酵母表达系统 | 第22-23页 |
| 2.2 毕赤酵母菌株 | 第23页 |
| 2.3 毕赤酵母表达载体 | 第23-27页 |
| 2.4 毕赤酵母的高密度发酵 | 第27-30页 |
| 第二章 α-淀粉酶AmyM在毕赤酵母中的表达和酶学性质研究 | 第30-66页 |
| 第一节 表达菌株的构建 | 第30-42页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第30页 |
| 1.2 培养基与常用溶液 | 第30-31页 |
| 1.3 工具酶与试剂 | 第31-32页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.1 表达载体构建策略 | 第32-33页 |
| 2.2 质粒pET29a-amyM与pEFaA载体质粒提取 | 第33页 |
| 2.3 amyM基因的扩增,纯化及TA克隆 | 第33-35页 |
| 2.4 表达载体pEFαA-amyM的构建 | 第35-38页 |
| 2.5 转化子鉴定 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.1 淀粉酶amyM基因的扩增 | 第38页 |
| 3.2 表达载体和目的基因的双酶切 | 第38-40页 |
| 3.3 构建成功的表达载体的线性化 | 第40页 |
| 3.4 验证电转化后的阳性克隆子 | 第40-42页 |
| 第二节 重组酶AmyM的酶学性质研究 | 第42-54页 |
| 1 材料与方法 | 第42-47页 |
| 1.1 菌株与试剂 | 第42页 |
| 1.2 重组酶AmyM的表达 | 第42-43页 |
| 1.3 重组酶AmyM的糖基化程度测定 | 第43-44页 |
| 1.4 淀粉酶AmyM酶活性的测定 | 第44-45页 |
| 1.5 重组酶AmyM的最适反应温度 | 第45页 |
| 1.6 重组酶AmyM的最适反应pH | 第45页 |
| 1.7 重组酶AmyM的温度稳定性 | 第45页 |
| 1.8 重组酶AmyM的pH稳定性 | 第45-46页 |
| 1.9 金属离子对重组酶AmyM的影响 | 第46页 |
| 1.10 有机试剂对重组酶AmyM的影响 | 第46页 |
| 1.11 高浓度的盐和乙醇对重组酶AmyM的影响 | 第46页 |
| 1.12 重组酶AmyM的高浓度的盐和乙醇稳定性 | 第46页 |
| 1.13 淀粉酶AmyM的水解产物分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-54页 |
| 2.1 重组酶AmyM的诱导表达 | 第47-48页 |
| 2.2 pH和温度对重组酶AmyM的活性和稳定性的影响 | 第48-49页 |
| 2.3 金属离子对重组酶AmyM的活性影响 | 第49-50页 |
| 2.4 有机试剂、表面活性剂和螯合剂对重组酶AmyM的活性影响 | 第50-51页 |
| 2.5 高浓度的盐和乙醇对酶活性和稳定性的影响 | 第51-53页 |
| 2.6 高效液相色谱分析水解产物 | 第53-54页 |
| 第三节 表达菌株的发酵条件优化 | 第54-66页 |
| 1 材料与方法 | 第54-57页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第54页 |
| 1.2 培养方法 | 第54-55页 |
| 1.3 实验指标测定方法 | 第55页 |
| 1.4 培养条件对产酶量的影响 | 第55-56页 |
| 1.5 响应面法对培养基优化 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-63页 |
| 2.1 培养条件对产酶的影响 | 第57-58页 |
| 2.2 菌体的生长曲线和产酶曲线 | 第58-59页 |
| 2.3 响应面法优化培养基 | 第59-63页 |
| 3 本章小结和讨论 | 第63-66页 |
| 第三章 α-淀粉酶AmyC的克隆、表达和酶学性质研究 | 第66-78页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第66页 |
| 1.2 培养基、试剂和仪器 | 第66页 |
| 1.3 目的基因amyC的扩增、纯化和TA克隆 | 第66-67页 |
| 1.4 表达载体pET29a-amyC的构建 | 第67页 |
| 1.5 重组表达载体pET29a-amyC的诱导表达 | 第67页 |
| 1.6 重组酶AmyC的酶学性质研究 | 第67-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-77页 |
| 2.1 重组酶AmyC的SDS-PAGE | 第69-70页 |
| 2.2 温度和pH对重组酶AmyC的活性和稳定性影响 | 第70-71页 |
| 2.3 金属离子对重组酶AmyC的活性影响 | 第71-72页 |
| 2.4 有机试剂、螯合剂等对重组酶AmyC的活性影响 | 第72页 |
| 2.5 重组酶AmyC的底物特异性 | 第72-74页 |
| 2.6 重组酶AmyC对不同底物的水解产物分析 | 第74页 |
| 2.7 重组酶AmyC对麦芽三糖的作用时间图 | 第74-75页 |
| 2.8 重组酶AmyC作用可溶性淀粉的蓝值测定 | 第75-76页 |
| 2.9 重组酶AmyC作用于可溶性淀粉的旋光度变化 | 第76-77页 |
| 3 本章讨论及小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 全文总结 | 第86-88页 |
| 主要创新点 | 第88-90页 |
| 附录 | 第90-94页 |
| 附录1 核酸和氨基酸序列 | 第90-94页 |
| 1 α-淀粉酶AmyM | 第90-91页 |
| 2 α-淀粉酶AmyC | 第91-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
