| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1. 叶绿体结构及功能 | 第11-13页 |
| 2. PSⅡ蛋白复合体是光合系统的重要元件 | 第13-14页 |
| 3. D1是PSⅡ蛋白复合体中的核心成分 | 第14-15页 |
| 4. CTP是D1蛋白成熟的关键酶 | 第15-16页 |
| 5. 本课题研究意义及获得的结果 | 第16-18页 |
| 第二章 载体构建 | 第18-34页 |
| 1. 材料与主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第18-19页 |
| 2. 实验方法 | 第19-31页 |
| 2.1 目的DNA片段制备 | 第19-26页 |
| 2.1.1 目的DNA片段说明 | 第19-20页 |
| 2.1.2 目的DNA片段模板制备 | 第20-22页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.1.4 目的DNA片段的克隆 | 第23-25页 |
| 2.1.5 目的DNA片段纯化 | 第25-26页 |
| 2.2 母体载体制备 | 第26-28页 |
| 2.2.1 母体载体说明 | 第26-27页 |
| 2.2.2 母体载体提取 | 第27-28页 |
| 2.3 限制性酶切分析 | 第28-29页 |
| 2.4 外源DNA片段与母体载体的连接 | 第29页 |
| 2.5 连接产物转大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.5.1 DH5α感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.5.2 连接产物转化感受态细胞 | 第30页 |
| 2.6 重组质粒的验证 | 第30-31页 |
| 2.6.1 转化实验验证 | 第30页 |
| 2.6.2 酶切验证 | 第30-31页 |
| 2.6.3 测序验证 | 第31页 |
| 3. 结果与讨论 | 第31-34页 |
| 3.1 植物总RNA提取评估分析 | 第31页 |
| 3.2 DNA片段回收纯度及浓度检测评估 | 第31-32页 |
| 3.3 重组质粒的筛选及验证 | 第32-33页 |
| 3.4 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 体外CTP酶活检测 | 第34-50页 |
| 1. 材料与主要试剂 | 第34-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第34-35页 |
| 2. 实验方法 | 第35-41页 |
| 2.1 蛋白诱导表达及提取 | 第35-37页 |
| 2.1.1 BL-21感受态细胞制备 | 第35页 |
| 2.1.2 重组质粒对BL-21的转化 | 第35页 |
| 2.1.3 GST融合蛋白诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.1.4 GST融合蛋白提取及纯化 | 第36页 |
| 2.1.5 目的蛋白提取 | 第36-37页 |
| 2.1.6 蛋白浓度测定 | 第37页 |
| 2.2 9aa抗体制备 | 第37-40页 |
| 2.2.1 免疫抗原设计 | 第37页 |
| 2.2.2 兔免疫抗体制备 | 第37-38页 |
| 2.2.3 免疫血清抗性验证 | 第38-39页 |
| 2.2.4 9aa特异性抗体的抗体 | 第39-40页 |
| 2.2.5 叶绿体的粗提 | 第40页 |
| 2.3 CTP体外酶活检测 | 第40-41页 |
| 2.3.1 酶活检测模型 | 第40-41页 |
| 2.3.2 酶活检测实验 | 第41页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第41-50页 |
| 3.1 实验蛋白提取结果讨论 | 第41-44页 |
| 3.2 免疫血清验证 | 第44-45页 |
| 3.3 9aa抗体纯度检测与分析 | 第45-47页 |
| 3.4 D1抗体纯度检测与分析 | 第47页 |
| 3.5 体外CTP酶活检测结果讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 植物突变体分析 | 第50-67页 |
| 1. 材料及主要试剂 | 第50页 |
| 1.1 实验材料 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-53页 |
| 2.1 CtpA/B/C蛋白抗体制备 | 第50-51页 |
| 2.2 植物突变体分析 | 第51-53页 |
| 2.2.1 植物突变体汇总 | 第51-52页 |
| 2.2.2 植物突变体DNA水平鉴定原理 | 第52页 |
| 2.2.3 植物突变体RNA水平鉴定原理 | 第52-53页 |
| 2.2.4 植物突变体蛋白水平鉴定原理 | 第53页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第53-67页 |
| 3.1 CtpA/B/C蛋白抗体免疫分析 | 第53-56页 |
| 3.2 缺失突变体4g-1和5g-1培养结果讨论 | 第56-58页 |
| 3.3 突变体4g-1DNA、RNA及蛋白水平分析 | 第58页 |
| 3.4 突变体4g-2DNA、RNA及蛋白水平分析 | 第58-59页 |
| 3.5 突变体3g-1DNA、RNA及蛋白水平分析 | 第59-61页 |
| 3.6 突变体5g-1DNA、RNA及蛋白水平分析 | 第61-62页 |
| 3.7 突变体5g-2DNA、RNA及蛋白水平分析 | 第62-64页 |
| 3.8 CtpA蛋白缺失突变体背景下,CtpB和CtpC蛋白表达量分析 | 第64-65页 |
| 3.9 CtpC蛋白缺失突变体背景下,CtpA和CtpB蛋白表达量分析 | 第65页 |
| 3.10 CtpC蛋白缺失突变体背景下,D1蛋白周转分析 | 第65-66页 |
| 3.11 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 转基因实验 | 第67-72页 |
| 1. 材料与主要试剂 | 第67页 |
| 1.1 实验材料 | 第67页 |
| 1.2 主要实验与仪器 | 第67页 |
| 2. 实验方法 | 第67-69页 |
| 2.1 GV3101农杆菌感受态制备 | 第67-68页 |
| 2.2 GV3101农杆菌转化 | 第68页 |
| 2.3 农杆菌侵染拟南芥 | 第68页 |
| 2.4 转基因植物抗性筛选 | 第68-69页 |
| 2.5 转基因植物DNA水平鉴定原理 | 第69页 |
| 3. 结果与讨论 | 第69-72页 |
| 3.1 转基因实验讨论 | 第69-70页 |
| 3.2 转基因植物抗性筛选结果讨论 | 第70页 |
| 3.3 转基因植物DNA水平分析 | 第70-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附表1：溶液配方 | 第80-83页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
