| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-19页 |
| ·松材线虫病及其防治 | 第9-12页 |
| ·病原线虫 | 第9-11页 |
| ·松材线虫寄主范围及危害症状 | 第11页 |
| ·病害防治 | 第11-12页 |
| ·化学药剂防治 | 第11-12页 |
| ·生物防治 | 第12页 |
| ·物理防治 | 第12页 |
| ·加强检疫 | 第12页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究进展 | 第12-16页 |
| ·苏云金芽孢杆菌简介 | 第12-13页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的生物学特性 | 第13页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白分类 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的杀虫机理 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽孢杆菌对线虫作用的研究 | 第15-16页 |
| ·杀线虫晶体蛋白cry5亚家族的研究 | 第16页 |
| ·根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化技术 | 第16-17页 |
| ·根癌农杆菌介导的丝状真菌转化的机理 | 第16-17页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化在丝状真菌中的应用 | 第17页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第17-18页 |
| ·本课题的研究技术路线 | 第18-19页 |
| 2 转cry5Ba3Φ 基因灰葡萄孢菌的获得及其对松材线虫生防效果的检测 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·实验仪器设备 | 第20-21页 |
| ·实验所用抗生素及其浓度 | 第21页 |
| ·实验所需化学试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·生物信息分析软件及网站 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-32页 |
| ·序列的优化合成 | 第22页 |
| ·基因组DNA和质粒的提取 | 第22-24页 |
| ·基因组DNA小量提取 | 第22-23页 |
| ·高浓度基因组DNA提取（试剂盒法） | 第23页 |
| ·质粒的提取 | 第23-24页 |
| ·目的片段获得与质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·酶切反应体系 | 第24页 |
| ·质粒酶切片段的去磷酸化 | 第24页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第24-25页 |
| ·连接反应体系 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态制备（CaCl2法） | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态转化 | 第25-26页 |
| ·农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化 | 第26-27页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第26页 |
| ·农杆菌电击转化 | 第26页 |
| ·农杆菌介导T-DNA转化 | 第26-27页 |
| ·基因组Southern杂交分析 | 第27-30页 |
| ·试剂配制 | 第27-28页 |
| ·DNA提取、酶切、电泳及变性 | 第28页 |
| ·电泳及变性 | 第28-29页 |
| ·DNA转膜、固定 | 第29页 |
| ·目的基因探针标记(随机引物法) | 第29页 |
| ·预杂交 | 第29-30页 |
| ·杂交 | 第30页 |
| ·印迹膜的冲洗 | 第30页 |
| ·显色 | 第30页 |
| ·基因表达分析 | 第30-31页 |
| ·生测实验 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-43页 |
| ·序列分析 | 第32-33页 |
| ·序列优化与合成 | 第33页 |
| ·载体构建 | 第33-35页 |
| ·质粒pTFCM-cry5Ba3Φ 转化根癌农杆菌AGL-1 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌介导的灰葡萄孢菌转化 | 第36-37页 |
| ·转基因灰葡萄孢的PCR验证 | 第37页 |
| ·转基因灰葡萄孢的遗传稳定性分析 | 第37-38页 |
| ·转cry5Ba3Φ 灰葡萄孢菌Southern blot鉴定 | 第38页 |
| ·qRT-PCR验证 | 第38-41页 |
| ·生防效果检测 | 第41-43页 |
| 4 总结与讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 个人简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
