| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| ·β-半乳糖苷酶概述 | 第9-11页 |
| ·β-半乳糖苷酶的来源 | 第9页 |
| ·β-半乳糖苷酶的应用 | 第9-10页 |
| ·β-半乳糖苷酶的研究进展 | 第10-11页 |
| ·低聚半乳糖的概述 | 第11-12页 |
| ·低聚半乳糖的性质 | 第11页 |
| ·低聚半乳糖的应用 | 第11页 |
| ·低聚半乳糖的生产 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第12-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第12页 |
| ·毕赤酵母表达异源蛋白分子水平优化策略 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母表达异源蛋白培养水平优化策略 | 第13页 |
| ·毕赤酵母表达异源蛋白细胞水平优化策略 | 第13-14页 |
| ·本课题的立题依据及意义 | 第14页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-25页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-21页 |
| ·大肠杆菌细胞的培养 | 第16页 |
| ·含目的基因的质粒 DNA 的提取 | 第16页 |
| ·PCR 扩增 F441Y 基因 | 第16-17页 |
| ·重组质粒的构建与转化 | 第17页 |
| ·E. coli 热激转化感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·E. coli 感受态细胞的热激转化 | 第17页 |
| ·重组质粒 DNA 的提取 | 第17页 |
| ·重组质粒 DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第18页 |
| ·胶回收目的片段 | 第18页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第18页 |
| ·E. coli 热激转化感受态细胞的制备 | 第18页 |
| ·E. coli 感受态细胞的热激转化 | 第18-19页 |
| ·重组表达质粒的筛选和鉴定 | 第19页 |
| ·重组表达载体 pPIC3.5K-F441Y 的线性化 | 第19页 |
| ·P. pastoris KM71 感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| ·P. pastoris KM71 感受态细胞的电转化 | 第20页 |
| ·P. pastoris KM71 高拷贝转化子的筛选 | 第20页 |
| ·重组毕赤酵母细胞的培养 | 第20页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取和目的基因的验证 | 第20-21页 |
| ·分析方法 | 第21-25页 |
| ·毕赤酵母细胞光密度的测定 | 第21页 |
| ·毕赤酵母细胞干重的测定 | 第21页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第21页 |
| ·oNPG 水解活力标准曲线的绘制 | 第21-22页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活力的测定方法 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第22-23页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶转苷产物的检测 | 第23页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的纯化 | 第23-24页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的最适温度和热稳定性分析 | 第24页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的最适 pH 和 pH 稳定性分析 | 第24页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的动力学分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-41页 |
| ·表达β-半乳糖苷酶的工程菌构建及发酵条件优化 | 第25-34页 |
| ·表达β-半乳糖苷酶的工程菌构建 | 第25-28页 |
| ·重组毕赤酵母 KM71/pPIC3.5K-F441Y 的摇瓶发酵条件优化 | 第28-32页 |
| ·重组毕赤酵母生产β-半乳糖苷酶的 3 L 罐发酵条件初步探究 | 第32-34页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的酶学性质研究 | 第34-36页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的最适温度和温度稳定性 | 第34-35页 |
| ·重组β-半乳糖苷酶的最适 pH 和 pH 稳定性 | 第35-36页 |
| ·利用全细胞和游离的重组β-半乳糖苷酶制备低聚半乳糖的工艺条件优化 | 第36-41页 |
| ·pH 对 GOS 的转化率的影响 | 第37页 |
| ·温度对 GOS 的转化率的影响 | 第37-38页 |
| ·初始乳糖浓度对 GOS 的转化率的影响 | 第38-39页 |
| ·加酶量和反应时间对 GOS 的转化率的影响 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
