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拟南芥VKOR基因缺失对抗逆基因AnnAT1的表达的影响

符号说明第1-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-24页
   ·盐胁迫第12-14页
     ·盐胁迫对植物生长发育的影响第12-13页
     ·盐胁迫对植物光合作用的影响第13页
     ·植物对盐胁迫的适应机制第13-14页
   ·干旱胁迫第14-16页
     ·干旱胁迫对植物生长的影响第15页
     ·干旱胁迫对植物生理特性的影响第15-16页
   ·植物的逆境Ca~(2+)信号转导第16-17页
     ·钙信号的产生第16-17页
     ·钙信号的转导在植物对逆境应答反应中的作用第17页
   ·逆境对植物体内氧化还原环境的影响第17-19页
     ·植物抗氧化系统第18页
     ·逆境胁迫下植物细胞氧化还原状态的改变第18-19页
   ·Annexin 1 蛋白第19-21页
     ·Annexins家族第19页
     ·Annexin 1 蛋白在植物逆境下的表达调控第19-20页
     ·Annexin 1 的过氧化物酶活性和植物抗逆过程中的功能第20-21页
   ·VKOR蛋白第21-23页
     ·VKOR蛋白的发现第21-22页
     ·VKOR蛋白的同源蛋白第22页
     ·VKOR蛋白的氧化功能第22-23页
   ·本研究的目的意义第23-24页
2 材料与方法第24-41页
   ·实验材料第24-25页
     ·植物材料第24页
     ·菌株与质粒第24页
     ·酶与各种生化试剂第24页
     ·主要实验仪器第24-25页
     ·引物第25页
   ·主要试剂的配制第25-28页
     ·实验相关溶液的配制第25-27页
       ·碱裂解法提取质粒相关溶液的配制第25-26页
       ·蛋白含量测定相关溶液的配制第26页
       ·SDS-PAGE缓冲液的配制第26-27页
       ·感受态制备相关试剂的配制第27页
       ·MS培养基贮存液的配制第27页
     ·培养基的配制第27-28页
   ·实验方法第28-41页
     ·AnnAT1 基因的扩增第28-29页
       ·引物设计第28页
       ·AnnAT1 基因的PCR扩增第28-29页
       ·AnnAT1 基因PCR扩增产物的回收第29页
     ·原核表达载体的构建第29-31页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第31-32页
       ·感受态大肠杆菌DHB4 的制备第31-32页
       ·连接产物的转化第32页
     ·阳性克隆的筛选和DNA序列测定第32-34页
     ·AnnAT1 在原核系统的诱导表达、纯化和抗体制备第34-37页
       ·E.coli BL21 原核表达的诱导第34页
       ·原核表达AnnAT1 的纯化第34-35页
       ·Annexin 1 抗体的制备第35-37页
     ·拟南芥总RNA的提取和mRNA的检测第37-38页
       ·Trizol法提取拟南芥总RNA第37页
       ·mRNA的qRT-PCR检测第37-38页
     ·拟南芥类囊体总蛋白的提取和Western Bloting的检测第38-39页
       ·拟南芥类囊体总蛋白的提取和蛋白含量测定第38页
       ·Western Bloting的检测第38-39页
     ·拟南芥负氧离子和过氧化氢积累量的测定第39-41页
3 结果与分析第41-51页
   ·AnnAT1 基因的克隆、表达和抗体制备第41-44页
     ·AnnAT1 基因的PCR扩增第41页
     ·AnnAT1 基因原核表达载体的构建和鉴定第41-43页
     ·Annexin 1 的蛋白的纯化第43页
     ·Annexin 1 抗体制备以及效价测定第43-44页
   ·AnnAT1 的表达在原核系统逆境胁迫过程中的作用第44-46页
   ·逆境中拟南芥VKOR对Annexin 1 的mRNA和蛋白水平的表达的影响第46-49页
     ·逆境中拟南芥VKOR对Annexin 1 的mRNA水平的表达的影响第46-48页
     ·逆境中拟南芥VKOR对Annexin 1 的蛋白水平的表达的影响第48-49页
   ·VKOR缺失对拟南芥逆境胁迫过程中负氧离子和过氧化氢积累的影响第49-51页
     ·负氧离子积累量测定第49-50页
     ·过氧化氢积累量测定第50-51页
4 讨论第51-54页
   ·Annexin 1 在植物逆境胁迫中的作用第51页
   ·VKOR对Annexin 1 的表达的影响第51-52页
   ·Annexin 1 的抗氧化功能第52-54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-62页
致谢第62页

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