| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·表观修饰和肌肉细胞的发生发展及肌纤维类型的关系 | 第12-13页 |
| ·肌肉生成中组蛋白去乙酰化酶和组蛋白乙酰化酶参与的功能 | 第13-15页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶家族 | 第13-14页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶家族功能 | 第14-15页 |
| ·14-3-3基因家族基因的研究进展 | 第15-18页 |
| ·14-3-3基因家族基因发挥生物学功能的作用方式 | 第15-16页 |
| ·14-3-3蛋白家族参与的信号通路 | 第16页 |
| ·14-3-3theta蛋白的研究进展 | 第16-18页 |
| ·Trichostatin A及其组蛋白去乙酰化酶抑制活性的调控功能 | 第18-21页 |
| ·Trichostatin A简介 | 第18页 |
| ·Trichostatin A对基因的调控研究 | 第18-21页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 3 试验材料 | 第23-27页 |
| ·试验样品 | 第23页 |
| ·DNA样品 | 第23页 |
| ·组织样品 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23页 |
| ·实验用耗材 | 第23-24页 |
| ·载体,菌株及细胞系 | 第24页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·主要药品及试剂 | 第25-27页 |
| 4 试验方法 | 第27-38页 |
| ·猪组织总RNA的提取及cDNA的制备 | 第27-28页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第27页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第28页 |
| ·反转录反应(Reverse transcription PCR) | 第28页 |
| ·猪14-3-3 theta基因编码区及启动子的克隆、测序 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| ·产物的回收、纯化和克隆测序 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第29-30页 |
| ·载体连接(参照pMD-18T Vector System说明书) | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆子的鉴定及测序 | 第30页 |
| ·DNA序列的生物信息学分析及相应的软件 | 第30-31页 |
| ·猪14-3-3 theta基因转录水平组织表达谱分析 | 第31-32页 |
| ·总RNA的提取及RNA浓度与质量的检测 | 第31页 |
| ·Q-PCR扩增体系 | 第31-32页 |
| ·融合表达载体及启动子活性鉴定载体的构建 | 第32-33页 |
| ·目的片段的获得 | 第32页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒的转化和鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·细胞培养和瞬时转染 | 第33-34页 |
| ·细胞培养与传代 | 第33页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第33-34页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第34页 |
| ·细胞转染 | 第34页 |
| ·细胞裂解及活性测定 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE胶的制作,蛋白质电泳及凝胶的染色 | 第34-36页 |
| ·SDS-PAGE胶的制作 | 第34-35页 |
| ·蛋白质的电泳 | 第35-36页 |
| ·胶体考马斯亮蓝染色 | 第36页 |
| ·细胞中蛋白质的提取,蛋白质量的检测及蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·细胞中蛋白质的提取 | 第36页 |
| ·蛋白质量的检测 | 第36页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·Western Blotting对目的蛋白的检测 | 第37-38页 |
| 5 实验结果 | 第38-51页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·猪14-3-3 theta基因的编码区序列克隆、测序 | 第38-39页 |
| ·细胞蛋白质量的检测 | 第39-40页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·融合蛋白的检测 | 第40-41页 |
| ·14-3-3 theta基因在大白猪的组织表达分析 | 第41-42页 |
| ·14-3-3 theta基因在大白猪及梅山猪背最长肌中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·14-3-3 theta基因在C2C12细胞分化过程中的表达趋势及TSA对分化的影响 | 第43-46页 |
| ·启动子的获得 | 第46-47页 |
| ·缺失载体的构建 | 第47-48页 |
| ·启动子活性的分析 | 第48-50页 |
| ·TSA处理对猪PK-15及猪肌卫星中14-3-3 theta表达的影响 | 第50-51页 |
| 6 讨论 | 第51-54页 |
| ·14-3-3 theta基因的转录调节和TSA对该基因的复杂调节机制的推断 | 第51-52页 |
| ·启动子活性的分析 | 第51页 |
| ·TSA对该基因的复杂调节机制的推断 | 第51-52页 |
| ·C2C12细胞的分化研究及该基因表达模式 | 第52-53页 |
| ·14-3-3 theta基因在大白猪及梅山猪背最长肌中差异表达研究 | 第53-54页 |
| 下一步工作 | 第54-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
