| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第13-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-18页 |
| 前言 | 第14页 |
| ·牛传染性鼻气管炎病的发展史 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·生物学特征 | 第14-15页 |
| ·临床症状 | 第15页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的诊断方法 | 第15-16页 |
| ·PCR法 | 第15页 |
| ·鉴别诊断 | 第15-16页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的防控 | 第16-18页 |
| ·单位疫苗 | 第16页 |
| ·重组疫苗 | 第16-18页 |
| 第2章 牛传染性鼻气管炎病毒PCR方法的建立 | 第18-25页 |
| ·研究目的与意义 | 第18页 |
| ·材料与方法 | 第18-20页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·病毒 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·试验方法 | 第18-20页 |
| ·设计牛传染性鼻气管炎病毒gG基因引物并合成 | 第18-19页 |
| ·病毒培养与毒价滴定 | 第19页 |
| ·DNA模板的提取 | 第19页 |
| ·RT-PCR | 第19-20页 |
| ·PCR反应体系 | 第20页 |
| ·特异性鉴定 | 第20页 |
| ·敏感性鉴定 | 第20页 |
| ·临床样本 | 第20页 |
| ·结果与分析 | 第20-24页 |
| ·PCR条件优化 | 第20-21页 |
| ·PCR反应特异性测定 | 第21-22页 |
| ·PCR反应敏感性测定 | 第22-23页 |
| ·牛鼻拭子样品的检测 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 第3章 牛传染性鼻气管炎gG基因的截短克隆表达 | 第25-34页 |
| ·研究目的意义 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-31页 |
| ·试验材料 | 第25-28页 |
| ·细胞、病毒 | 第25页 |
| ·菌种及质粒材料 | 第25-26页 |
| ·主要试剂和培养基配制 | 第26-28页 |
| ·试验方法 | 第28-31页 |
| ·病毒增殖纯化及模板制备 | 第28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·截短gG基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收纯化及克隆 | 第29页 |
| ·表达载体的构建及原核表达 | 第29页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·PCR扩增与克隆结果 | 第31-32页 |
| ·IBRV-gG在大肠杆菌中的截短表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·western blot检测 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第4章 抗IBRV-gG蛋白单克隆抗体和多克隆抗体制备的研究 | 第34-44页 |
| ·研究目的意义 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·试验材料 | 第34-35页 |
| ·细胞和动物 | 第34页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第34页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-38页 |
| ·动物免疫 | 第35页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞活化 | 第35页 |
| ·细胞融合 | 第35-37页 |
| ·间接ELISA法阳性杂交瘤细胞筛选 | 第37页 |
| ·有限稀释法杂交瘤细胞亚克隆 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·免疫动物血清效价 | 第38页 |
| ·细胞融合 | 第38-39页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第39页 |
| ·小鼠腹水单克隆抗体效价的测定 | 第39页 |
| ·多克隆抗体的生产和效价测定 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·动物的免疫 | 第41页 |
| ·细胞融合 | 第41-42页 |
| ·杂交瘤阳性细胞株的筛选 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-44页 |
| 第5章 牛传染性鼻气管炎IBRV-gG双抗体夹心ELISA方法建立 | 第44-49页 |
| ·研究目的和意义 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-47页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·主要试剂及材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·IBRV-gG抗原最佳稀释度测定 | 第44-45页 |
| ·IBRV-gG单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第45页 |
| ·IBRV-gG多克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第45页 |
| ·IBRV-gG夹心ELISA检测IBRV灵敏度与特异性 | 第45-46页 |
| ·IBRV-gG夹心ELISA的应用 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-48页 |
| ·IBRV-gG sELISA检测IBRV-gG各条件的确定 | 第47页 |
| ·IBRV-gG夹心ELISA操作步骤 | 第47页 |
| ·IBRV-gG夹心ELISA检测IBRV灵敏度与特异性 | 第47-48页 |
| ·IBRV-gG夹心ELISA的应用 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第6章 牛传染性鼻气管炎IBRV-gG竞争ELISA方法建立 | 第49-55页 |
| ·研究目的和意义 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·腹水的制备及单抗的纯化 | 第49页 |
| ·制备酶标抗体 | 第49-50页 |
| ·建立单克隆抗他竞争ELISA方法 | 第50页 |
| ·特异性鉴定 | 第50页 |
| ·用竞争ELISA和细胞毒性中和试验检测样品 | 第50-51页 |
| ·用牛传染性鼻气管炎gB阻断ELISA检测试剂盒检测上述样品 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·IBRV-gG竞争ELISA检测IBRV-gG反应各条件的确定 | 第51-52页 |
| ·抗原和抗体的浓度选择 | 第51页 |
| ·血清最适合稀释度的选择 | 第51页 |
| ·阴阳界线的确定 | 第51-52页 |
| ·选择抗体稀释液 | 第52页 |
| ·选择合适的封闭液 | 第52页 |
| ·最佳竞争反应时间 | 第52页 |
| ·IBRV-gG竞争ELISA检测的灵敏度与特异性 | 第52-54页 |
| ·特异性鉴定 | 第52页 |
| ·符合试验 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第7章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
