| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| ·集胞藻 PCC6803 概述 | 第14-15页 |
| ·集胞藻 PCC6803 生理特点 | 第14页 |
| ·集胞藻 PCC6803 遗传特点 | 第14页 |
| ·集胞藻 PCC6803 的胁迫响应 | 第14-15页 |
| ·Sigma 因子概述 | 第15-17页 |
| ·Sigma 因子重要性 | 第15页 |
| ·蓝细菌中 Sigma 因子分类及其功能 | 第15-16页 |
| ·细菌 S2P 通过在膜切割转录调控因子、释放σ因子参与胁迫响应 | 第16-17页 |
| ·S2P 蛋白酶研究现状 | 第17-20页 |
| ·哺乳动物中的 S2P 蛋白酶 | 第17页 |
| ·其他生物中 S2P 蛋白酶研究 | 第17-19页 |
| ·集胞藻 PCC6803 中 S2P 蛋白酶研究现状 | 第19-20页 |
| ·集胞藻 PCC6803 中 S2P 蛋白酶 Slr0643 缺失突变体研究 | 第20-22页 |
| ·Sll0856 与 Sll0857 共转录分析 | 第22-23页 |
| ·单顺反子与多顺反子 mRNA | 第22-23页 |
| ·Sll0856 与 Sll0857 共转录分析 | 第23页 |
| ·酵母双杂交分析 Sll0856 与 Sll0857 蛋白相互作用关系 | 第23-26页 |
| ·酵母双杂交实验原理 | 第23-26页 |
| ·酵母双杂交系统特点 | 第26页 |
| ·酵母双杂交分析 Sll0856 与 Sll0857 蛋白相互作用 | 第26页 |
| ·融合标签技术应用 | 第26-31页 |
| ·融合标签概述 | 第26-27页 |
| ·不同融合标签特点 | 第27-31页 |
| ·研究内容及意义 | 第31-32页 |
| 第二章 RT-PCR 考察 Sll0856/Sll0857/Sll0858 转录关系 | 第32-43页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与仪器 | 第32-34页 |
| ·主要材料 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要培养基和常用试剂配制 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·集胞藻 PCC6803 培养 | 第34-35页 |
| ·使用器具处理 | 第35页 |
| ·集胞藻 PCC6803 总 RNA 提取 | 第35-36页 |
| ·RNA 样品中去 DNA | 第36-37页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第37-38页 |
| ·Sll0856/Sll0857/Sll0858 共转录分析 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-42页 |
| ·集胞藻 PCC6803 总 RNA 提取 | 第39页 |
| ·Sll0856/Sll0857/Sll0858 共转录 RT-PCR 验证 | 第39-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 酵母双杂交考察 Sll0857 与 Sll0856 的相互作用 | 第43-60页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料与仪器 | 第43-48页 |
| ·主要材料 | 第43-44页 |
| ·主要仪器与设备 | 第44-45页 |
| ·主要培养基和试剂配制 | 第45-48页 |
| ·实验方法 | 第48-55页 |
| ·pAD-56/pBD-57、pAD-57/pBD-56 重组质粒的构建 | 第48-54页 |
| ·引物设计与合成 | 第48页 |
| ·Synechocystis sp.PCC6803 基因组的提取 | 第48-49页 |
| ·构建重组质粒 | 第49-51页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第52-53页 |
| ·质粒提取与鉴定 | 第53-54页 |
| ·酵母双杂交验证 Sll0857 与 Sll0856 相互作用 | 第54-55页 |
| ·酵母的复苏 | 第54页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第54页 |
| ·酵母感受态的转化 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-59页 |
| ·重组质粒构建 | 第55-56页 |
| ·重组质粒 pAD-56/pBD-57、pAD-57/pBD-56 筛选、酶切及 PCR 鉴定 | 第56-58页 |
| ·酵母双杂交结果 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 验证体内酶切作用突变体构建及假定底物体外诱导表达纯化 | 第60-89页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料与仪器 | 第61-67页 |
| ·主要材料 | 第61-62页 |
| ·主要仪器与设备 | 第62页 |
| ·主要培养基和常用试剂配制 | 第62-67页 |
| ·实验方法 | 第67-73页 |
| ·体内含融合标签的突变体 0856-0857-tag/WT(△P/WT) 及0856-0857-tag/△0643- Kmr(△P/0643)构建 | 第67-70页 |
| ·体内融合标签质粒构建流程图 | 第67页 |
| ·重组标签质粒克隆及鉴定 | 第67页 |
| ·集胞藻 PCC6803 自然转化及转基因单藻落的获得 | 第67-68页 |
| ·0856-0857-tag/WT(△P/WT) 及 0856-0857-tag/△0643- Kmr (△P/0643) PCR 鉴定 | 第68页 |
| ·western blot 检测融合标签在集胞藻 PCC6803 体内的表达 | 第68-70页 |
| ·S2P 蛋白酶假定底物体外诱导表达纯化 | 第70-73页 |
| ·假定底物重组质粒构建策略 | 第70-71页 |
| ·推定底物重组粒质粒克隆与鉴定 | 第71页 |
| ·重组质粒融合蛋白的小量诱导表达及 SDS-PAGE 分析 | 第71-72页 |
| ·S2P 蛋白酶假定底物体融合蛋白纯化 | 第72-73页 |
| ·结果分析 | 第73-87页 |
| ·体内含标签突变体构建及鉴定分析 | 第73-79页 |
| ·构建体内融合标签引物设计 | 第73-75页 |
| ·0856-0857-tag/WT(△P/WT) 及 0856-0857-tag/△0643- Kmr(△P/0643) PCR 鉴定 | 第75-76页 |
| ·体内融合标签构建目的 | 第76-78页 |
| ·HA 抗体尝试检测融合标签体内表达结果图 | 第78-79页 |
| ·假定底物诱导表达纯化 | 第79-87页 |
| ·假定底物重组质粒引物设计 | 第79页 |
| ·假定底物重组质粒鉴定 | 第79-80页 |
| ·S2P 蛋白酶假定底物诱导表达条件优化 | 第80-84页 |
| ·集胞藻 PCC6803 中 S2P 假定底物的表达纯化 | 第84-86页 |
| ·Slr0643 对 Sll0857 酶切作用尝试 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 结论与展望 | 第89-92页 |
| 1 结论 | 第89-90页 |
| 2 创新之处 | 第90页 |
| 3 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附件 | 第101页 |
