西瓜ClIMP基因的功能鉴定
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 1 前言 | 第15-25页 |
| ·低温胁迫和植物耐低温机理的研究进展 | 第16-21页 |
| ·低温对植物的伤害 | 第16-20页 |
| ·低温对植物细胞膜的伤害 | 第17-18页 |
| ·低温胁迫下相关物质合成增多 | 第18-19页 |
| ·低温胁迫下信号转导及诱导基因表达的调控 | 第19-20页 |
| ·低温对西瓜的伤害 | 第20-21页 |
| ·关于Gateway技术 | 第21-24页 |
| ·Gateway技术介绍 | 第21-22页 |
| ·Gateway技术原理 | 第22-24页 |
| ·研究的目的、意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| ·试验材料 | 第25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·西瓜耐冷相关基因ClIMP的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·开放阅读框ORF查找 | 第26页 |
| ·蛋白质保守结构域预测分析 | 第26页 |
| ·氨基酸一级结构和理化性质等的预测分析 | 第26页 |
| ·同源性搜索和进化树分析 | 第26-27页 |
| ·ClIMP基因低温表达分析 | 第27-29页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| ·ClIMP定量表达分析 | 第28-29页 |
| ·ClIMP基因开放阅读框的克隆 | 第29-31页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第30页 |
| ·回收产物与载体的连接 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·重组子的筛选及测序 | 第31页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第31-34页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·入门载体的构建 | 第32-33页 |
| ·克隆基因两侧引入attB重组位点 | 第32页 |
| ·BP反应 | 第32-33页 |
| ·转化大肠杆菌感受态 | 第33页 |
| ·重组子的筛选 | 第33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·LR反应 | 第33页 |
| ·转化大肠杆菌感受态 | 第33页 |
| ·重组子的筛选 | 第33-34页 |
| ·表达载体的酶切验证 | 第34页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第34-35页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·表达载体质粒转入农杆菌 | 第34-35页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥 | 第35页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第35-37页 |
| ·抗性培养基筛选转基因拟南芥 | 第35-36页 |
| ·转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第36页 |
| ·转基因拟南芥的RT-PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·At3g55390突变体的鉴定 | 第37页 |
| ·纯合突变体鉴定 | 第37页 |
| ·At3g55390基因敲除鉴定 | 第37页 |
| ·低温胁迫下拟南芥的性状分析 | 第37-40页 |
| ·低温胁迫下拟南芥表型 | 第37-38页 |
| ·相对电导率测定 | 第38页 |
| ·渗透势测定 | 第38页 |
| ·脯氨酸含量测定 | 第38-39页 |
| ·冷诱导基因的表达 | 第39-40页 |
| ·盐胁迫下拟南芥的性状分析 | 第40页 |
| ·渗透胁迫下拟南芥的性状分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-58页 |
| ·西瓜耐冷相关基因ClIMP的生物信息学分析 | 第41-44页 |
| ·ClIMP基因全长序列 | 第41页 |
| ·序列翻译和开放阅读框ORF查找 | 第41-42页 |
| ·蛋白质保守结构域预测分析 | 第42-43页 |
| ·氨基酸一级结构和理化性质等的预测分析 | 第43页 |
| ·同源性搜索和进化树分析 | 第43-44页 |
| ·ClIMP基因低温表达分析 | 第44-45页 |
| ·ClIMP基因开放阅读框的克隆 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第46页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第46-48页 |
| ·抗性培养基筛选转基因拟南芥 | 第46-47页 |
| ·转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·转基因拟南芥的RT-PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·At3g55390突变体的鉴定 | 第48-49页 |
| ·低温胁迫下拟南芥的性状分析 | 第49-55页 |
| ·低温胁迫下拟南芥表型 | 第49-52页 |
| ·相对电导率测定 | 第52页 |
| ·渗透势测定 | 第52-53页 |
| ·脯氨酸含量测定 | 第53-54页 |
| ·冷诱导基因的表达 | 第54-55页 |
| ·盐胁迫下拟南芥的性状分析 | 第55-57页 |
| ·渗透胁迫下拟南芥的性状分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论与展望 | 第60-61页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·后续工作展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录一 常用培养基和相关试剂的配制 | 第68-69页 |
| 附录二 pMD 18-T Vector载体图谱 | 第69页 |
| 附录三 入门载体pDONR221载体图谱 | 第69-70页 |
| 附录四 表达载体pMDC32载体图谱 | 第70页 |
