| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| ·生物能源及其发展现状 | 第13-14页 |
| ·生物能源 | 第13页 |
| ·生物能源的发展现状 | 第13-14页 |
| ·微生物油脂及产油机理 | 第14-18页 |
| ·微生物油脂及产油微生物 | 第14-15页 |
| ·产油机理 | 第15-18页 |
| ·微生物油脂的生物合成机理 | 第15-17页 |
| ·微生物油脂的合成代谢调控机理 | 第17-18页 |
| ·油脂积累过程的关键酶 | 第18-21页 |
| ·葡萄糖的摄取和糖酵解过程 | 第18页 |
| ·油脂生物合成过程的关键酶 | 第18-19页 |
| ·油脂合成代谢调控过程中的关键酶 | 第19-21页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶 | 第19-20页 |
| ·ATP依赖型的柠檬酸裂解酶 | 第20页 |
| ·苹果酸酶 | 第20-21页 |
| ·油脂合成过程中所需的还原力 | 第21-22页 |
| ·皮状丝孢酵母概述 | 第22页 |
| ·皮状丝孢酵母的特性 | 第22页 |
| ·皮状丝孢酵母的应用 | 第22页 |
| ·课题研究目的意义和内容 | 第22-24页 |
| 第2章 发酵条件对皮状丝孢酵母生长和产油的影响 | 第24-38页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌种及保藏方法 | 第24页 |
| ·培养基和培养条件 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·培养条件 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·菌体浓度的测量 | 第26页 |
| ·菌体干重的测量 | 第26-27页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第27-28页 |
| ·测定方法 | 第27页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·铵离子浓度的测定 | 第28-29页 |
| ·测定原理和方法 | 第28页 |
| ·铵离子标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·油脂含量的测量 | 第29页 |
| ·油脂中脂肪酸组分的测定 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-36页 |
| ·碳氮比的优化 | 第30-32页 |
| ·培养条件对菌种发酵的影响 | 第32-35页 |
| ·装液量对发酵的影响 | 第32-33页 |
| ·温度对发酵的影响 | 第33-34页 |
| ·初始pH对发酵的影响 | 第34-35页 |
| ·生长培养基和产油培养基中皮状丝孢酵母的生长和产油特性比较 | 第35-36页 |
| ·油脂脂肪酸组成的分析 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 油脂积累过程中NADPH合成相关酶反应活性研究 | 第38-48页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·菌种及保藏方法 | 第38页 |
| ·培养基和培养条件 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·细胞浓度的测定 | 第40页 |
| ·细胞干重的测定 | 第40页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第40页 |
| ·铵离子浓度的测定 | 第40页 |
| ·油脂的提取 | 第40页 |
| ·溶液的配置 | 第40-41页 |
| ·菌体的破碎 | 第41页 |
| ·细胞粗酶液的制备 | 第41页 |
| ·蛋白的测定 | 第41-42页 |
| ·BSA标准曲线的绘制 | 第41-42页 |
| ·样品蛋白的测定 | 第42页 |
| ·酶活的测定方法 | 第42-43页 |
| ·酶比活的计算方法 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·氮限培养基中皮状丝孢酵母体内ME和G6PDH活性变化对油脂积累的影响 | 第43-44页 |
| ·两种发酵培养基下ME和G6PDH活性变化的比较 | 第44-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第4章 油脂积累过程中NADPH合成相关基因转录研究 | 第48-63页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌种及保藏方法 | 第48页 |
| ·培养基和培养条件 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·培养方法 | 第48-49页 |
| ·酶和试剂 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-56页 |
| ·细胞的培养及生长测定 | 第50页 |
| ·细胞的培养 | 第50页 |
| ·细胞生长的测定 | 第50页 |
| ·菌体的破碎 | 第50页 |
| ·皮状丝孢酵母总RNA的提取及cDNA的获得 | 第50-51页 |
| ·皮状丝孢酵母总RNA的提取 | 第50-51页 |
| ·去DNA | 第51页 |
| ·皮状丝孢酵母cDNA的获得(反转录) | 第51页 |
| ·基因片段的扩增 | 第51-53页 |
| ·氨基酸保守模块的获得 | 第52页 |
| ·简并引物的设计 | 第52页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第52-53页 |
| ·基因保守段扩增产物序列的获得 | 第53页 |
| ·一些常规的分子操作方法 | 第53-55页 |
| ·目标产物的胶回收 | 第53页 |
| ·回收产物的T载体连接 | 第53-54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第54页 |
| ·质粒的提取 | 第54-55页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·me和zwf基因片段序列的获得 | 第56-59页 |
| ·简并引物的设计 | 第56-57页 |
| ·基因的扩增结果 | 第57-59页 |
| ·qRT-PCR实验 | 第59-62页 |
| ·菌体总RNA的提取和qRT-PCR引物验证 | 第60-61页 |
| ·不同条件下me和zwf的转录变化情况 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 硕士期间论文发表及获奖情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
