| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·以 HSA 为载体的长效重组药物蛋白的研究现状 | 第7-9页 |
| ·长效化的主要措施 | 第7-8页 |
| ·HSA 融合技术 | 第8-9页 |
| ·HSA 融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第9-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统的开发与利用 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母表达 HSA 融合蛋白的优点及不足 | 第10-12页 |
| ·毕赤酵母表达重组蛋白的降解控制策略 | 第12-14页 |
| ·立题意义及研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌种与质粒 | 第15页 |
| ·主要生化试剂 | 第15页 |
| ·工具酶与相关试剂盒 | 第15页 |
| ·仪器设备 | 第15-16页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·蛋白纯化相关溶液 | 第16-17页 |
| ·蛋白纯化相关溶液 SDS-PAGE 相关溶液 | 第17页 |
| ·Western blot 相关溶液 | 第17页 |
| ·等电聚焦考马斯亮蓝染色相关溶液 | 第17页 |
| ·酵母感受态制备相关溶液 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-25页 |
| ·酵母的培养 | 第17页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第17-18页 |
| ·66 kDa 降解片段 IH-66 和 Hβ-66 的分离纯化 | 第18页 |
| ·重组毕赤酵母胞内蛋白的提取 | 第18页 |
| ·蛋白质的分析方法 | 第18-20页 |
| ·HSA 定点突变及突变体在 GS115 中的表达 | 第20-23页 |
| ·HSA 及突变体在乳酸克鲁维酵母 GG799 中的表达 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-41页 |
| ·HSA 融合蛋白表达过程中的胞内外降解分析 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白发酵上清中的降解情况 | 第25页 |
| ·工程菌胞内蛋白与发酵上清 Western blot 分析 | 第25-26页 |
| ·主要降解片段的纯化与分析 | 第26-34页 |
| ·66 kDa 降解片段 IH-66 和 Hβ-66 分离纯化 | 第26-27页 |
| ·IH-66 和 Hβ-66 的纯度检测 | 第27-28页 |
| ·IH-66 和 Hβ-66 的性质分析 | 第28-34页 |
| ·载体蛋白 HSA 降解位点的推测 | 第34页 |
| ·HSA 定点突变及在毕赤酵母中的表达 | 第34-36页 |
| ·表达载体 pPIC9k-mHSA 的构建 | 第34-35页 |
| ·工程菌 GS115-pPIC9k-mHSA 的构建及筛选 | 第35-36页 |
| ·HSA 及 mHSA 的降解情况的比较 | 第36页 |
| ·HSA 及突变体在乳酸克鲁维酵母中的表达 | 第36-41页 |
| ·表达载体 pKLAC1-HSA 及 pKLAC1-mHSA 的构建 | 第37页 |
| ·工程菌 K．lactis GG799-pKLAC1-(m)HSA 的构建及筛选 | 第37-38页 |
| ·降解情况分析 | 第38-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-42页 |
| 一、主要结论 | 第41页 |
| 二、存在的问题与展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
