| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-18页 |
| ·绪论 | 第10页 |
| ·课题研究的背景和意义 | 第10-13页 |
| ·课题设计和技术路线 | 第13-16页 |
| ·突变体的选择 | 第13页 |
| ·表达系统和载体的选择 | 第13-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统表达干扰素产品的概况 | 第13-14页 |
| ·酵母表达系统的概况 | 第14页 |
| ·表达载体的选择 | 第14-15页 |
| ·课题完成的技术路线 | 第15-16页 |
| ·课题研究的核心内容 | 第16-18页 |
| ·干扰素的纯化制备背景 | 第16-17页 |
| ·纯化工艺的优化方案 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-25页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·菌株、细胞株、质粒和抗生素 | 第18页 |
| ·分子生物学实验用酶 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·主要溶液配制 | 第19-20页 |
| ·分子生物学实验用溶液 | 第19页 |
| ·发酵实验用溶液 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE电泳溶液 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-24页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第20-21页 |
| ·质粒提取方法 | 第20-21页 |
| ·DNA电泳方法 | 第21页 |
| ·毕赤酵母细胞X33感受态的制备 | 第21页 |
| ·酵母细胞的电转化 | 第21页 |
| ·检测方法 | 第21-24页 |
| ·SDS-PAGE法检测蛋白表达 | 第21-23页 |
| ·OD600值测定方法 | 第23页 |
| ·免疫印迹实验方法 | 第23页 |
| ·蛋白质含量检测 | 第23页 |
| ·干扰素生物学效价测定方法 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24-25页 |
| 第3章 基因工程菌的构建、筛选和高密度发酵 | 第25-30页 |
| ·高表达工程菌株的构建和筛选 | 第25-28页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·突变型干扰素-τ基因的设计、合成和扩增 | 第25-26页 |
| ·构建表达载体pPICZ α A-IFN-τ | 第26页 |
| ·pPICZ α A-IFN-τ转化Pichia pastoris X33构建表达菌株 | 第26-27页 |
| ·筛选鉴定高表达菌株 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-28页 |
| ·总结 | 第28页 |
| ·5L发酵罐高密度培养工程菌 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29页 |
| ·总结 | 第29-30页 |
| 第4章 纯化工艺的优化 | 第30-47页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·传统的工艺流程 | 第32页 |
| ·疏水配基筛选实验 | 第32页 |
| ·盐析实验 | 第32页 |
| ·Octyl Sepharose FF疏水层析优化实验 | 第32-33页 |
| ·Source Q离子交换层析优化 | 第33页 |
| ·Superdex 75分子筛层析 | 第33页 |
| ·收率计算方法 | 第33-34页 |
| ·实验过程 | 第34-45页 |
| ·初步纯化的优化 | 第34-39页 |
| ·蛋白降解的分析 | 第34页 |
| ·疏水层析条件的优化 | 第34-39页 |
| ·筛选合适的疏水配基 | 第34-36页 |
| ·对影响疏水层析选择性的因素进行优化实验 | 第36-38页 |
| ·步级洗脱条件的确定和验证 | 第38-39页 |
| ·疏水层析工艺与原初步纯化步骤的比较 | 第39页 |
| ·对中度纯化的优化 | 第39-43页 |
| ·对精细纯化的优化 | 第43-44页 |
| ·整个纯化过程的总结 | 第44-45页 |
| ·总结和讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 蛋白性质的检测和生物学效价的测定 | 第47-52页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·样品蛋白纯度的检测 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE电泳银染色法 | 第47页 |
| ·HPLC法检测纯度 | 第47-48页 |
| ·SE-HPLC法分析纯度 | 第48页 |
| ·蛋白性质的鉴定 | 第48页 |
| ·生物学效价的测定 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-51页 |
| ·SDS-PAGE电泳银染法结果 | 第48页 |
| ·HPLC法结果 | 第48页 |
| ·凝胶过滤分析色谱法结果 | 第48-49页 |
| ·质谱法测定分子量 | 第49-51页 |
| ·生物学效价的测定结果 | 第51页 |
| ·总结 | 第51-52页 |
| 第6章 细胞学模型的初步抗病毒效果研究 | 第52-54页 |
| 第7章 讨论、总结与展望 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |