| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一部分：文献综述 | 第13-25页 |
| 1 果树病毒的特点 | 第13页 |
| 2 果树病毒种类 | 第13-14页 |
| 3 果树危害 | 第14-15页 |
| 4 梨树病毒病的研究 | 第15-16页 |
| 5 果树病毒基因组的特点及研究现状 | 第16-19页 |
| ·病毒基因组及其特点 | 第16-17页 |
| ·果树病毒基因组国内外研究现状 | 第17-19页 |
| ·果树病毒基因组国外研究现状 | 第17-18页 |
| ·我国果树基因组研究现状 | 第18-19页 |
| ·葡萄基因组研究 | 第18页 |
| ·苹果和梨病毒基因组研究 | 第18-19页 |
| ·香蕉病毒基因组研究 | 第19页 |
| ·草莓病毒基因组研究 | 第19页 |
| ·核果类病毒基因组研究 | 第19页 |
| 6 苹果茎沟病毒研究现状 | 第19-23页 |
| ·ASGV 病毒检测 | 第19-21页 |
| ·指示植物法 | 第19-20页 |
| ·血清学检测法 | 第20页 |
| ·分子生物学检测法 | 第20-21页 |
| ·ASGV 地理分布与寄主范围 | 第21-22页 |
| ·ASGV 症状特点 | 第22页 |
| ·ASGV 病毒特性与细胞病理学 | 第22页 |
| ·病毒形态 | 第22页 |
| ·理化特性 | 第22页 |
| ·基因组及株系 | 第22-23页 |
| 7 发展趋势 | 第23-25页 |
| ·应用分子生物学技术进行病毒鉴定和检测 | 第23-24页 |
| ·加强病毒病防治研究 | 第24-25页 |
| ·弱毒疫苗 | 第24页 |
| ·紫外线诱导植物防卫素 | 第24页 |
| ·抗病毒基因转化 | 第24页 |
| ·作物脱毒技术 | 第24页 |
| ·抗病毒剂的研制 | 第24-25页 |
| 第二部分 实验研究 | 第25-44页 |
| 1 材料和方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·供试材料 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-32页 |
| ·总RNA 的提取方法 | 第25-26页 |
| ·RNA 提取缓冲液以及试剂 | 第25-26页 |
| ·提取方法 | 第26页 |
| ·总RNA 的检测 | 第26页 |
| ·梨树苹果茎沟病毒RT-PCR 体系 | 第26-27页 |
| ·CDNA 合成 | 第26页 |
| ·梨树病毒PCR 体系 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的电泳检测 | 第27页 |
| ·目的片段的克隆 | 第27-29页 |
| ·DNA 片段的切胶纯化 | 第27页 |
| ·与载体质粒的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备（CACL2 法） | 第27-28页 |
| ·转化和筛选 | 第28页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第28页 |
| ·重组克隆鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组克隆的质粒与菌液PCR 鉴定体系 | 第28-29页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·目的片断的测序和分析 | 第29页 |
| ·ASGV、ACLSV 一步多重RT-PCR 检测体系的建立 | 第29-31页 |
| ·ASGV 一步RT-PCR 检测体系的建立 | 第29-30页 |
| ·ACLSV 一步RT-PCR 检测体系的建立 | 第30页 |
| ·ASGV、ACLSV 一步多重RT-PCR 反应体系的建立 | 第30页 |
| ·利用一步多重RT-PCR 检测体系检测样品 | 第30-31页 |
| ·斑点杂交优化体系的建立 | 第31-32页 |
| ·非放射性地高辛和生物素标记CDNA 探针的制备 | 第31页 |
| ·适合ASGV 的斑点杂交的方法 | 第31-32页 |
| ·两种探针灵敏度比较 | 第32页 |
| ·斑点杂交检测限点研究 | 第32页 |
| 2. 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·针对不同香梨组织不同方法总RNA 提取结果 | 第32-33页 |
| ·库尔勒香梨ASGV 部分基因组目的片段的获得 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒PCR 鉴定和菌液PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·ASGV 特异性扩增片段的序列分析 | 第34-38页 |
| ·目的片段核甘酸及氨基酸序列的获得 | 第34-36页 |
| ·目的片段与不同分离物核甘酸及氨基酸同源性分析 | 第36-38页 |
| ·梨主要病毒一步多重RT-PCR 检测体系的建立 | 第38-39页 |
| ·ASGV 一步RT-PCR 检测体系的建立 | 第38页 |
| ·ACLSV 一步RT-PCR 检测体系的建立 | 第38页 |
| ·ASGV 和ACLSV 一步多重RT-PCR 检测体系的建立以及检测限点的研究 | 第38-39页 |
| ·ASGV 和ACLSV 一步多重RT-PCR 特异性检测 | 第39页 |
| ·非放射性CDNA 探针的鉴定 | 第39-40页 |
| ·斑点杂交检测限点的研究 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| ·关于总RNA 的提取 | 第41页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·ASGV 部分基因组序列分析 | 第42页 |
| ·关于ASGV 检测 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43页 |
| 5 本论文的创新点及难点 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录一:本实验用溶液、缓冲液成份及配制 | 第50-53页 |
| 附录二:测序图谱 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 导师评阅表 | 第56页 |
