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利用农杆菌dps基因建立共表达系统在大肠杆菌中生产辅酶Q10

Preface第1-5页
Abstract第5-7页
摘要第7-12页
Chapter 1 Ubiquinone-10 Biological Functions, Biosynthesis and Medical Application第12-51页
 1. Introduction第12-13页
 2. Redox cycle of UQ第13-16页
 3. UQ in mitochondrial respiration & the mitochondrial UQ pool第16-18页
 4. Antioxidant第18-25页
  4. 1 Regeneration of α-tocopherol第19-21页
  4. 2 Stabilzation of ubisemiquinone radicals第21-22页
  4. 3 UQ promoted dismutation of superoxide anion第22-25页
 5. Prooxidant第25-30页
 6. Biosynthesis of UQ in microorganisms第30-36页
  6. 1. Biosynthesis of Quinone Moiety第30-32页
  6. 2. Biosynthesis of polyprenyl side chain第32-35页
   6. 2. 1. Non-mevalonate pathway第32-34页
   6. 2. 2. Mevalonate pathway第34页
   6. 2. 3. Elongation & Determination of polyprenyl side chain第34-35页
  6. 3. Ring Modification第35-36页
   6. 3. 1. Prenylation of Quinonoid Ring第35页
   6. 3. 2. Decarboxylation第35页
   6. 3. 3. Hydroxylations and methylations第35-36页
 7. Comparison of UQ biosynthetic genes of E.coli and yeast第36-40页
 8. Recombinant Production第40-42页
 9. Medical uses第42-51页
  9. 1. Cardiovascular diseases第43-47页
   9. 1. 1. Atherosclerosis第43-45页
   9. 1. 2. Angina第45页
   9. 1. 3. Congestive Heart Failure (CHF)第45-46页
       ·Hypertension第46页
       ·Cardiac Surgery第46-47页
     ·Toxin-induced cardiomyopathy第47-48页
     ·Neurodegenerative diseases第48-49页
     ·Alzheimer's Disease第48页
       ·Parkinson's Disease第48-49页
     ·Cancer第49页
     ·Male Infertility第49-50页
     ·Statins and UQ-10第50-51页
Chapter 2 Genetic Manipulation第51-63页
 1. Scheme of the study第51页
 2. Materials and Methods第51-57页
     ·Bacterial strains and Plasmids第51-52页
     ·Growth Media and Culture Conditions第52页
     ·Chemicals and Enzymes第52页
     ·DNA Manipulations第52页
     ·Preparation of genomic DNA from A.tumefaciens第52-53页
     ·Cloning of dps Gene第53页
     ·Expression of dps gene in E. coli第53-54页
     ·Cloning of the Genes ubiCA, ubiA and ubiG from E. coli第54-55页
     ·Construction of the Plasmids Containing Genes of ubiCA, ubiA and ubiG第55页
     ·Electrophoretic analysis第55页
     ·Extraction and analysis of Ubiquinones第55-57页
 3. Results and discussions第57-63页
     ·DNA sequence determination and Nucleotide sequence accession number第57页
     ·Cloning and Nucleotide Sequence Analysis of Genes ubiC, ubiA and ubiG第57-59页
     ·Construction of the expression system第59页
     ·Construction of the Recombinant Co-expression Vectors第59-61页
     ·Identification of UQ-10 biosynthesis第61-62页
     ·Co-expression of the dps Gene separately with ubiCA, ubiA, and ubiG Genes in E. coil第62-63页
Chapter 3 Fermentation第63-100页
 1. Introduction第63-88页
   ·Microbial Growth第64-67页
   ·Bacterial growth characteristic第67-68页
   ·Types of fermentation第68-75页
     ·Batch fermentation第68-71页
     ·Continuous fermentation第71-73页
     ·Fed-batch fermentation第73-75页
     ·Factors affecting the growth rate第75-77页
       ·Effect of substrate concentration第75-76页
       ·Effect of substrate and/or product inhibition第76页
       ·Effect of temperature第76-77页
       ·Effect of pH第77页
     ·Fermentor systems第77-82页
       ·Stirring and mixing第77-78页
       ·Gas exchange and mass transfer第78-81页
       ·Heat production第81-82页
     ·Process management第82-88页
 2. Materials and Methods第88-91页
     ·Growth Media第88页
       ·Shake flask culture第88页
       ·Fermentation in 5 L bioreactor第88页
     ·Shake flask experiment第88-89页
     ·Fermentation parameters and bioreactor第89-90页
     ·Analytical methods第90-91页
     ·Plasmid stability第91页
 3. Results and discussions第91-100页
   ·Shake flask experiments of E. coli BL21/pDPSca.第91-94页
   ·Fed-batch experiments of E.coli BL21/pDPSca.第94-100页
     ·Fed-batch culture using glucose as the carbon source-RUN A第94-97页
     ·Fed-batch culture using glycerol as the carbon source and lactose as inducer-RUN B第97-100页
Conclusion第100-104页
Difficulties and suggestions第104-105页
References第105-116页
Acknowledgement第116页

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