| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第14-26页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1. 破骨细胞形成抑制因子研究进展 | 第15-18页 |
| ·OPG 的基因结构 | 第15页 |
| ·OPG 的蛋白结构 | 第15-17页 |
| ·OPG 的作用机理 | 第17页 |
| ·OPG 在骨疾病方面的潜在应用 | 第17-18页 |
| ·展望 | 第18页 |
| 2. 杆状病毒表达载体系统研究进展 | 第18-23页 |
| ·杆状病毒的分类及形态特征 | 第19页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第19-20页 |
| ·家蚕BmNPV 表达系统相对于昆虫细胞AcMNPV 表达系统的优势 | 第19-20页 |
| ·杆状病毒表达系统的进展及展望 | 第20页 |
| ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达载体系统简介 | 第20-21页 |
| ·杆状病毒多角体蛋白的概述 | 第21-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-26页 |
| 1. 实验目的和意义 | 第23-24页 |
| 2. 研究内容 | 第24-25页 |
| 3. 实验流程图 | 第25-26页 |
| 第二部分 研究论文 | 第26-65页 |
| 第一章 破骨细胞形成抑制因子在大肠杆菌中的融合表达、纯化及其生物活性测定 | 第27-49页 |
| 1. 材料与试剂 | 第27-33页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·订购试剂 | 第27-28页 |
| ·自配试剂 | 第28-33页 |
| 2. 方法 | 第33-43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-39页 |
| ·重组病毒Bm-OPG DNA 的提取 | 第33页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第33-34页 |
| ·凝胶回收、纯化PCR 产物 | 第34页 |
| ·目的片段 OPG/Polh-OPG 与载体 pBacPAK8、pET-32a、pBacPAK8-Polh、pBacPAK8-Polh-OPG 的双酶切回收 | 第34-35页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli TG1/ BL21 (DE3)感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·连接反应 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的表达 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第39页 |
| ·蛋白凝胶电泳检测 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| ·包涵体的溶解与样品制备 | 第40-41页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第41页 |
| ·包涵体的复性 | 第41-42页 |
| ·Western blotting 检测 | 第42页 |
| ·融合蛋白的生物活性测定 | 第42-43页 |
| 3. 结果 | 第43-47页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白Polh-OPG 的降血钙活性 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-49页 |
| 第二章 破骨细胞形成抑制因子在家蚕细胞中的融合表达、纯化及其生物活性测定 | 第49-65页 |
| 1. 材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·订购试剂 | 第49-50页 |
| ·自配试剂 | 第50页 |
| 2. 方法 | 第50-58页 |
| ·重组Bacmid-Polh-OPG 的构建 | 第50-55页 |
| ·转移载体pFastBac HTb-Polh-OPG 的构建 | 第50-51页 |
| ·DH10Bac 菌感受态的制备 | 第51页 |
| ·重组质粒的转化 | 第51-52页 |
| ·重组Bacmid 的提取 | 第52页 |
| ·重组Bacmid 的PCR 鉴定 | 第52-55页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第55-56页 |
| ·家蚕细胞BmN 贴壁培养 | 第55页 |
| ·细胞冻存 | 第55页 |
| ·细胞复苏 | 第55-56页 |
| ·病毒的扩增培养 | 第56页 |
| ·病毒滴度测定(终点稀释法) | 第56页 |
| ·重组病毒Bm-Polh-OPG 的获得 | 第56-57页 |
| ·重组Bacmid-Polh-OPG 转染家蚕BmN 细胞 | 第56-57页 |
| ·重组病毒Bm-Polh-OPG 的PCR 鉴定 | 第57页 |
| ·目的蛋白在家蚕细胞中的表达分析 | 第57页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·融合蛋白的生物活性测定 | 第57-58页 |
| 3. 结果 | 第58-63页 |
| ·重组质粒pFastBac HTb-Polh-OPG 的构建 | 第58页 |
| ·重组Bacmid 的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白在家蚕细胞中的表达、纯化分析 | 第59-62页 |
| ·重组蛋白Polh-OPG 的降血钙活性 | 第62-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
